基于形态学标记及ssr+标记的甜瓜主栽品种分类鉴定研究

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1、研究论文中国蔬菜CHINAVEGETABLES2014（6）：20-27基于形态学标记及SSR标记的甜瓜主栽品种分类鉴定研究*李瑞峰　高　鹏　朱子成　栾非时（东北农业大学园艺学院，黑龙江哈尔滨150030）摘　要：利用形态学标记、SSR分子标记技术对市场上广泛种植的甜瓜品种进行分类鉴定。利用形态学聚类分析，得到60份材料间的相似系数为0.73～0.94，在相似系数为0.74处，60份甜瓜材料被分为2类，为薄皮甜瓜和厚皮甜瓜；在相似系数为0.77处，薄皮甜瓜按照单果质量、熟性、果皮底色、芳香气分为4组，实现初步分类。经过SSR标记聚类分析，得到60份材料

2、间的相似系数为0.75～0.95，当相似系数为0.77时，可以将所有供试材料分为6类。利用SSR分子标记技术，为60份不同甜瓜品种构建唯一的指纹图谱。18对SSR引物，每对引物可以检测到4～11条数目不等的多态性条带，平均为8条。多态性信息含量（PIC）平均为0.71，变化范围为0.58～0.88。采用QR编码为60份甜瓜材料构建了唯一的指纹图谱。试验结果表明形态学标记对60份材料实现初步分类，SSR分子标记则能够有效地区别60份材料，并且为建立甜瓜品种的核酸指纹图谱库提供了理论数据，实现对甜瓜品种进行快速、准确的鉴定。关键词：甜瓜；形态学标记；SSR标

3、记；聚类分析；指纹图谱自1981年以来，中国甜瓜产量一直稳居世界状易受环境影响，因此品种鉴定分类不能只靠田间第一，在世界总产量中占据半壁江山。正是由于我性状。分子标记技术的发展，为品种鉴定提供了新国是甜瓜生产和消费第一大国，近年来中国甜瓜的的途径（Naitoetal.，2008）。前人已将分子标记技市场潜力快速开发，每年都有大量的甜瓜新品种涌术广泛应用于葫芦科瓜类作物，Staub等（2004）入市场。随着新育成品种的不断增加，骨干亲本的利用RAPD分子标记技术对希腊甜瓜进行了多样重复使用，新基因资源的缺乏，新育成品种的鉴定性研究；刘万勃等（2002）利用

4、RAPD和ISSR分难度逐渐增大；加之当前中国甜瓜种子市场尚不够子标记技术对37份甜瓜种质进行了遗传多样性研规范，一些单位受商业利益驱动掩盖或篡改品种名究；徐志红等（2008）利用AFLP分子标记技术对称，导致甜瓜市场材料普遍存在着由于同名异物或31份甜瓜材料遗传多样性和亲缘关系进行了研究；同物异名现象导致的品种真实性问题（王美荣等，Szabó等（2005）利用SSR技术对47份中世纪甜瓜2010）。为解决甜瓜种子经营中的纠纷与市场混乱种质进行了分析；艾呈祥等（2006）在比较分析各问题，有必要建立中国甜瓜品种的核酸指纹库，为试材图谱的基

5、础上，探讨了品种指纹图谱的统计学甜瓜品种纯度与真实性的鉴定提供理论依据和技术方法，并对构建的2个甜瓜杂交种的指纹图谱进行支撑，保护瓜农和育种家们的利益。了可信度分析，建立了适于种子检验中使用的标准由于甜瓜本身类型非常丰富，且杂交种表型性SSR标记指纹图谱。宋海斌（2012）利用SSR分子标记技术对471份甜瓜材料进行真实性鉴定，构建李瑞峰，女，硕士研究生，专业方向：甜瓜分子育种，E-mail：SSR指纹代码，发现其中52份材料的指纹代码不lrf0208@163.com具有唯一性。本试验利用形态学标记对60份甜瓜*通讯作者（Correspondingaut

6、hor）：栾非时，女，教授，博士生导师，材料的12个表观性状进行调查记录，初步分类，专业方向：西甜瓜分子遗传育种，E-mail：luanfeishi@sina.com同时利用SSR分子标记构建指纹图谱，以期为中国收稿日期：2014-01-06；接受日期：2014-03-14基金项目：国家西甜瓜产业技术体系—分子育种岗位项目（CARS-26-02）甜瓜指纹图谱库的建立提供理论依据。—20—《中国蔬菜》学术论文下载www.cnveg.org中国蔬菜CHINAVEGETABLES研究论文冻，然后置于-80℃冰箱中保存。待果实成熟时调1　材料与方法查12个

7、生物学性状。分子试验在东北农业大学园1.1　试验时间与地点艺学院西甜瓜分子遗传育种实验室进行，主要包括试验于2012年3月至2013年10月进行。其材料DNA提取、SSR-PCR扩增等。中田间试验在东北农业大学试验实习基地24号大1.2　试验材料棚进行。将60份甜瓜材料每份取20粒饱满种子，以60份中国市场上广泛种植的甜瓜品种为试经过8h浸种，于28℃培养箱催芽，待80%种子材，包括46份薄皮甜瓜，14份厚皮甜瓜（表1）。出芽时播种于营养钵中，幼苗2～3片真叶时定植。供试材料分别来自北京（9份）、甘肃（3份）、河南（2在整枝时每株摘取幼嫩叶片混匀，放入液

8、氮中速份）、黑龙江（10份）、吉林（23份）、辽宁（