原生质体融合法选育酵母菌株酿造低甲醇高总酯蒸馏酒

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2014，42(13):4050，4054责任编辑李菲菲责任校对况玲玲原生质体融合法选育酵母菌株酿造低甲醇高总酯蒸馏酒*林小江，周世水(华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州510006)摘要［目的］选育酿造低甲醇高总酯蒸馏酒的酿酒酵母菌株。［方法］利用原生质体融合技术，对低甲醇酿酒酵母与高总酯酿酒酵母进行融合。［结果］选育出的酵母菌种酿造蒸馏酒中的相对甲醇含量为145．31mg/L，比初始低甲醇菌株降低了22．8%，总酯含量为0．79g/L，增加了83．7%。［结论］原

2、生质体融合法成功选育出低甲醇高总酯的酿酒酵母菌株。关键词原生质体融合;蒸馏酒;甲醇;总酯中图分类号S609．9;TS261．1;TS262．3文献标识码A文章编号0517－6611(2014)13－04050－01BrewingDistilledLiquorofLowMethanolandHighTotalEsterswithSaccharomycescerevisiaeBredbyProtoplastFusionLINXiao-jiang，ZHOUShi-shui(CollegeofBiologicalScienceandEngi

3、neering，SouthChinaUniversityofTechnology，Guangzhou，Guang-dong510006)Abstract［Objective］ScreeningSaccharomycescerevisiaeofbrewingdistilledliquorwithlowmethanolandhightotalesters．［Method］Tech-nologyofprotoplastfusionwasusedtofusingSaccharomycescerevisiaeoflowmethanolandS

4、accharomycescerevisiaeofhightotalesters．［Ｒesult］Themethanolwas145．31mg/Linthedistilledliquorfermentedbyprotoplastfusion，decreasing22．8%thanstrainoflowmethanol．Thetotalesterwas0．79g/L，increasing83．7%．［Conclusion］TheSaccharomycescerevisiaeoflowmethanolandhightotalestersw

5、asobtainedbytech-nologyofprotoplastfusion．KeywordsProtoplastfusion;Distilledliquor;Methanol;Totalesters酿造酒中都含有一定浓度的甲醇，其中约50%甲醇来源中，3000r/min离心10min收集菌体，用HPBS洗涤离心2于发酵原料中的果胶质、纤维素经水解产生，另外50%甲醇次，加入1mlHPBS，预处理剂0．05mol/LEDTA2．5ml、0．5［1］来源于酵母代谢甘氨酸生成。由于甲醇对人体来说是一mol/Lβ-巯基乙醇0．2ml

6、，35℃预处理30min，3000r/min种有害物质，因此，国标对酒中甲醇有严格的规定，如以粮食离心5min，用HPBS洗涤离心2次，再加入0．3g/L蜗牛酶为原料酿造的蒸馏酒中相对甲醇含量(按酒精度60%vol计溶液1．0ml，35℃水浴30min。3000r/min离心10min后再算)不得超过400mg/L，薯干类原料的蒸馏酒中不得超过用HPBS洗涤离心2次，悬浮于HPBS中保存，并分别涂布到［2］1200mg/L。HCM平板和CM平板，28℃培养，若HCM上长出菌落而CM［5－6］酯是中国白酒香味的主要来源之一，其含量和种

7、类直接上无，表明已制备好原生质体。6影响到白酒的品质，且受到酿酒酵母、生香酵母等微生物发1．2．2原生质体融合。分别取10cfu/ml的低甲醇酵母原［3－4］酵的影响。因此，笔者采用原生质体融合技术筛选出1生质体、浓香酵母原生质体的菌悬液4ml到培养皿中，30W株既能提高总酯、又降低甲醇的酵母融合菌株，应用到酿酒紫外灯20cm处照射70s，吸取1．0ml菌悬液60℃保温14上不仅能提高酒的安全性和口感品质，而且简化生产操作，min。再分别取0．5ml到5ml离心管，加1．0ml促融剂，32将具有很好的开发前景。℃保温40min，40

8、00r/min离心10min，用HPBS洗涤离心2［7］1材料与方法次，取0．1ml涂布于HCM上，28℃培养3～5d。1．1材料1．2．3融合菌株的发酵。挑取平板上长出的多个菌落接种1．1．1菌种。低甲醇酿酒酵母、高酯香酵母，华南理