利用原生质体融合和诱变育种技术选育高酶活菌株_张文学.pdf

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1、DOI:10.15961/j.jsuese.2003.06.016第35卷第6期四川大学学报(工程科学版)Vol.35No.62003年11月JOURNALOFSICHUANUNIVERSITY(ENGINEERINGSCIENCEEDITION)Nov.2003文章编号:1009-3087(2003)06-0066-05利用原生质体融合和诱变育种技术选育高酶活菌株张文学,刘春莉,蒋宏(四川大学食品科学与工程系,四川成都610065)摘要:以白曲霉(Aspergilluskawachii)基因工程菌TR12

2、和黑曲霉(Aspergillusniger)34309为出发菌株,分别用纤维素酶和纤维素酶、溶菌酶的混合酶液制得了两个亲本的原生质体。在研究了培养时间、培养方法、酶解时间、酶解液的配比等条件对原生质体产量影响的基础上,以PEG诱导进行了原生质体的融合,并进行了紫外线照射的诱变育种。通过比较在菌落外观、颜色及形态上与白曲霉和黑曲霉菌株的不同,以及进行分离培养和液态培养摇瓶筛选,获得了一株具有较高酶活力的新菌株,其耐酸性α-淀粉酶活性和糖化酶活性分别达到91.2u/ml和3216.2u/ml的水平。关键词:原生

3、质体融合;诱变育种;液态培养;筛选中图分类号:Q939.97文献标识码:AScreeningofHigherEnzymeActivityStrainwithProtoplastFusionandMutagenisisZHANGWen-xue,LIUChun-li,JIANGHong(Dept.ofFoodSci.andEng.,SichuanUniv.,Chengdu610065,China)Abstract:UsingtheAspergillusKawachiigeneticengineeringstra

4、inTR12andAspergillusniger34309astheoriginalstrains,twoparentprotoplastswereobtainedrespectivelyincellulasesolutionormixedsolutionwithcellulaseandlysozyme.Basedofthestudyontheimpacttotheprotoplastsunderdifferentconditionsofculturetime,culturemethod,enzymoly

5、sistimeandprescriptionofenzymolysissolution,protoplastsfusionwasdoneinthePEGsolution.Thenmutationbreedingwasmadewithultravioletrayradiation.Throughcomparingitscolonyappearance,colorandconfigurationwithTR12and34309,whilecarriedthroughisolationcultureandshak

6、er-flaskculture,finallyscreenabetterstrain.Theen-zymicactivitiesofacidstableα-amylaseandglucoamylasereached91.2u/mland3216.2u/ml,respectively.Keywords:protoplastfusion;mutationbreeding;liquidculture;screening原生质体融合技术起源于60年代,而后不断的交频率高,进行杂交所受的限制小,重组体种类较丰富和发展

7、,至今,已经形成了原生质体融合育种,多,遗传物质的传递更为完整,可以获得性状优良的原生质体诱变育种和原生质体转化育种等一系列技重组体等优点。除此以外,原生质体融合技术还具术。自1979年,匈牙利的Pesti首先提出融合育种有存在着两株以上同时参与融合以形成融合子的可[1]提高青霉素产量的报告后,这项技术已经越来越广能,以及提高菌株产量的潜力几率较大等特点。泛的应用于实际工作中。原生质体融合技术具有杂本研究室基于我国在耐酸性α-淀粉酶研究上的不足以及我国白酒工业、淀粉糖工业、酒精等发酵收稿日期:2003-01

8、-14工业对耐酸性α-淀粉酶实际需求的增加,利用基基金项目:教育部留学回国人员启动基金资助项目因工程技术获得了具有多拷贝耐酸性α-淀粉酶和作者简介:张文学(1963-),男,研究员.研究方向:食品生物技术.第6期张文学,等:利用原生质体融合和诱变育种技术选育高酶活菌株67糖化酶融合基因的白曲霉工程菌TR12菌株,在液液体培养基使用无琼脂的2%YPD,其它同固体态AP培养基中培养,其产耐酸性α-淀粉酶和糖化培养法。