不同培养条件下空肠弯曲菌胞外多糖合成研究

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1、动物医学进展，２０１４，３５（１２）：２３－２６ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ不同培养条件下空肠弯曲菌胞外多糖合成研究李安，秦晓庆，赵树臣，侯振中＊（东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨１５００３０）摘要：为探讨空肠弯曲菌生物膜耐药机理，采用硫酸－蒽酮法测定了浮游菌和生物膜菌胞外多糖的产量。结果表明，两种状态细菌合成的水溶性胞外多糖量，随着时间的延长，呈现出先增加后下降的趋势。在同一时间点，生物膜菌黏附状态均显著低于浮游状态（Ｐ＜０．０５）；水不溶性胞外多糖除了黏附状态合成量高于浮游状态外，不具有明显的规律。不同状态细菌合成胞外多糖差异显著，生物膜所处的

2、酸性环境、营养物质的耗尽等可能是产生差异的原因。关键词：空肠弯曲菌；胞外多糖；硫酸－蒽酮法中图分类号：Ｓ８５２．６１３文献标识码：Ａ文章编号：１００７－５０３８（２０１４）１２－００２３－０４空肠弯曲菌（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｄｅｒｊｅｊｕｎｉ）是一种人控空肠弯曲菌病和研究开发新型药物，具有重要的［１０］兽共患病原菌，能引起牛与绵羊流产、诱发童子鸡和指导意义。生物膜状态细菌与浮游菌之间的差雏驼鸟坏死性肝炎、造成犊牛、狗、狐狸等动物腹异是导致细菌产生耐药性的根本原因，本文采用硫［１］［２－３］泻，传染源主要是与人密切接触的畜禽，人类酸－蒽酮法，测定不同状态的空肠弯曲菌胞外多糖合主要通过食

3、用受到污染的动物产品、未经煮熟的禽成量，分析了导致两种状态下的细菌合成细胞外多［４］肉和生牛奶等感染。欧盟调查表明，在引起禽肉糖能力变化的可能原因，为探索生物膜耐药机理，阻食品安全的微生物菌类中，空肠弯曲菌排名仅次于断生物膜形成、控制疾病传播提供科学依据。［５］沙门氏菌和李斯特杆菌。在我国空肠弯曲菌也是１材料与方法［６］导致腹泻的主要病原菌之一，国家食品监测网已［７］１．１材料经将该病原菌列为重点监测对象。国内外对空肠１．１．１主要仪器ＳＷ－ＣＪ－５型超净工作台，上海锦弯曲菌潜在的致病因素和致病机制尚不明确，大体屏仪器仪表有限公司；ＬａｂＪａｒ型ＡＧ系列厌氧罐，广可概括为黏附、侵袭

4、、产生毒素和分子模拟机制等四州海太光电生物科技有限公司；ＨＨｏＢＬＬ：５００－Ｓ型个方面，但它们在致病机理中的具体作用还不清楚。恒温培养箱，上海跃进医疗器械厂；空肠弯曲菌本是一种对生存环境要求极其苛刻的微需氧菌，但竟然具有如此高的致病能力，由此推Ｅ１９１ＴＣ１＆Ｅ１９１ＩＲ二氧化碳培养箱，西盟生命技术（国际）公司；ＫＱ－５００ＤＥ型数控超声波清洗器，昆山断它可能有一种特殊的保护机制即生物膜。有研究表明生物膜及其所分泌物质可通过多种途径对抗机市超声仪器有限公司；７５２Ｎ型紫外分光光度计，上体免疫防御，导致细菌产生或增强耐药性，进而造成海元析仪器有限公司；ＬＤＺ５－２型离心机，北京医用

5、慢性迁徙性感染［８］。胞外多糖是生物膜形成基质之离心机厂。一，其组成的三维结构生物膜，对细菌在载体表面附１．１．２菌株与试剂空肠弯曲菌标准株购自中国着以及细菌之间集聚、维持生物膜结构、提供营养方工业微生物菌种保藏管理中心；胰蛋白胨、蛋白胨、面均起着十分重要的作用。细菌生物膜的存在使空偏重亚硫酸钠、酵母浸膏、葡萄糖、氯化钠、亚硫酸氢肠弯曲菌几乎对所有抗菌药有不同程度的耐药性，钠、万古霉素多黏菌素Ｂ、三甲氧苄氨嘧啶乳酸盐、给临床上对细菌感染治疗带来极大挑战，更重要的焦性没食子酸、无水碳酸钠、ＡＲ级葡萄糖、蒽酮试是其耐药性可通过食物链传播，对动物尤其是对人剂、硫酸溶液均购自哈尔滨博润生物

6、有限公司。［９］类的食品安全造成严重危害。因此，阐明空肠弯１．２方法曲菌对抗生素的耐药机制和耐药性传播机制，对防１．２．１菌液的预处理将复苏后菌种进行传代培收稿日期：２０１４－０４－１５基金项目：东北农业大学博士启动基金项目（２０１０ＲＣＢ４０）；黑龙江省博士后科研启动金项目（ＬＢＨ－Ｑ１１１７４）作者简介：李安（１９８８－），女，黑龙江肇东人，硕士，主要从事空肠弯曲菌研究。＊通讯作者２４动物医学进展２０１４年第３５卷第１２期（总第２５８期）养，４２℃微需氧培养４８ｈ后，用改良布氏肉汤稀释洗涤３次后离心，同样保留上清液。向上清液中分至ＯＤ６００ｎｍ＝０．０５０。菌液分装，设定０、１

7、２、２４、别加入０．５ｍＬ蒽酮溶液和５ｍＬ９４０ｍＬ／Ｌ的浓硫３６、４８ｈ共５个时间点，每个时间点三个重复，其中酸，１００℃水浴１０ｍｉｎ后，冷却１０ｍｉｎ，以蒸馏水为一组设定为黏附组，于３７℃恒温箱培养，另一组设空白，在６２０ｎｍ波长处测定各管的ＯＤ值。数据用定为浮游组，于１００ｒ／ｍｉｎ的３７℃摇床上培养，分平均值±标准差表示，使用ＳＰＳＳ１９数据分析系统别培养至规定时间后，取出相应培养管作为待测样。做单因素方差分析，Ｐ＜０．０５为差异显著，Ｐ＞０．０５１．２．２