不同来源空肠弯曲菌在4℃饥饿条件下能否进入活但非可培养状态及其形态随时间改变

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1、目录ISlIIJlIftllllltllFInlPllllJlJlllllIIIPllJY2582542中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4研究论文不同来源空肠弯曲菌在4。C饥饿条件下能否进入活的但非可培养状态及其形态随时间的改变前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8再Ij舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．13附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．25综述活的但非可培养(VBNC)状态细菌的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯32致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯43个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44中文摘要不同来源空肠弯曲菌在4℃饥饿条件下能否进入活的但非可培养状态及其形态随时间的改变摘要目的：1本实验室保存的不同来源空肠弯曲菌在4。C饥饿条件下在35天的观察期内能否进入活的但非可培养状态。2观察本实验室保存的不同来源空肠弯曲菌在4。C饥饿条件下在35天的观察期内其革兰染色形态随时间的变化。方法：1空肠弯曲菌菌株的复苏和传代：取自神经病学实验室(河北医科大学第二医院)-80。C冰箱中保存的格林一巴利综合征患者分离培养出的空

4、肠弯曲菌菌株LC株，lulei株，由鸡粪便中分离培养出的chicken株和非GBS源的NCTCl1168株，待冻存的菌株自然消融后，接种于哥伦比亚血平板(含7％无菌脱纤维羊血)上，放置于42℃微需氧(10％C0。、5％0。、8596N2)条件的三气培养箱中，所有菌株培养24小时对应的P．代菌株回收，取P，代菌落三区划线接种于含7％无菌脱纤维羊血的哥伦比亚血平板上，放置于三气培养箱，42。C微需氧(1096C0。、5960：、85％N：)条件下，培养24小时获得各菌株相应的P。代菌株，取P。代菌落三区划

5、线接种法接种于含7％无菌脱纤维羊血的哥伦比亚血平板培养基上，置于三气培养箱，42℃微需氧(10％C0。、5％0。、85％N。)条件下，培养24小时得到各菌株相应的P。代菌株。2鉴定空肠弯曲菌：革兰染色法显示菌株为革兰阴性杆状菌，马尿酸水解试验结果显示为阳性。3收菌用无菌接种环分别刮取4株空肠弯曲菌少量P。代细菌于盛有3mlPBS(PH为7．2+-0．1)液的无菌西林瓶内，振荡器振荡充分摇匀制成菌悬液，每株菌株做4个备份菌悬液并做好记号，所有的菌悬液浓度用细菌浊度仪定量在3,105cfu／ml。4饥饿状

6、态：将上述盛有菌悬液的无菌西林瓶置于4。C冰箱内，不需要振荡。5分别在菌悬液置于冰箱内的第0天，第5天，第10天⋯⋯用CTC-DAPI双染法计数总的细菌数，活细菌数，平板直接计数法(HPC)中文摘要计数可培养细菌数。分别对每株空肠弯曲菌的一个备份同时计数总细菌数，活细菌数及可培养细菌数。6平板直接计数法用无菌双蒸水连续稀释的菌悬液样本(O．Iml)一式三份接种到含7％无菌脱纤维羊血的哥伦比亚血平板培养基上。微需氧(10％C0。、5％0。、85％N。)42℃条件下孵育48h，计数在适当的稀释度下的CFU

7、s，并可以计数原来起初的样本中的CFUs。当可培养细胞少于300／ml时，O。iml水样本涂布在10个含5％马血的哥伦比亚血平板培养皿上。7CTC-DAPI双染法在相应的时间点，取出来自空肠弯曲菌悬浮液中的样本并根据Cappeliereta1．(1997)技术用CTC和DAPI染色细胞。为了激发细胞呼吸，0．5ml脑心浸液和100ul的0．059／mL丙酮酸溶液加入到要进行分析的0．5ml菌悬液中。CTC用双蒸水稀释到最终浓度即5mmoi／L，然后混合液在微需氧42℃下孵育4h。接着细胞会经多聚黑碳膜

8、过滤(0．2um／孔，直径25IIⅡ11)，并用5ug／mLDAPI液覆盖5min，目的是复染。最后，染色剂会被真空抽滤，在盖玻片盖上前会滴上非荧光的油。405nm的激发滤光片和455nm二色镜的OlympusBX53荧光显微镜来观察，这样可以同时看到这两种染色。随机计数每个滤片的20个显微视野。每个样本，计数4个滤片。呼吸的细胞计数RCCs显示CTC甲腊晶体，总细胞计数TCCs是用DAPI染色的。结果可以换成相应的原始样本中每mL细菌数，并可以计算出R