peg11基因在自然繁殖牛和体细胞核移植牛中印记及dna甲基化分析硕士论文

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1、分类号：Q当垒!密级：公珏单位代码：!鲤叁壹学号：2Q!Q!Q2PEGll基因在自然繁殖牛和体细胞核移植牛中印记及DNA甲基化分析GenomicImprintingandDNAmethylationstatusofPEGllgeneinnaturallyreproducedandSCNTCattle学位申请人：石运娇指导教师：李世杰教授学科专业：生物化学与分子生物学学位类别：理学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一三年五月二十八日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他

2、人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑皇垦壅些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：乃豇缉签字日期：。捌弓年箩月碍日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑兰垦盛些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑i垦壅些烂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：乃这畸签字

3、日期：弦侈年垦月琚日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：导师虢毵羔签字日期：加侈年岁月巧曰电话：邮编：摘要体细胞核移植技术(somaticcellnucleartransfer，SCND，又称体细胞克隆技术，在医疗、农业及畜牧业等诸多领域有重要的应用价值。尽管体细胞核移植已经在多种哺乳动物中获得成功，但克隆效率仍然很低，只有2—5％的成活率，即使是存活下来的克隆动物也多伴有器官发育异常，这些制约了体细胞核移植技术的广泛应用。在体细胞核移植过程中，体细胞核放弃已有的高度分化的体细胞模式，进行重编程形成全能性的胚胎模式，此过程称为表观重编程。目前认为，供体核的不完全重编程导致

4、在发育过程中有重要作用的基因异常表达或没有表达是克隆效率低下的主要原因。基因组印记是由表观修饰导致的基因表达具有亲本特异性，而DNA基化是调控基因组印记的一种主要表观修饰方式。我们选择在胚胎和胚盘发育中有重要作用的DLKl-D103f[J记域的PEGll印记基因进行研究。通过PCR．SSCP方法在PEGll基因894nt位置找到～个SNP位点f～G)，用于等位基因特异基因表达和DNA甲基化状态分析。结果发现，在自然繁殖牛的心、肝、脾、肺、肾、肌肉和脂肪7个组织中均表达，并且表现为单等位基因(G)。为了确定基因内DNA甲基化是否调控基因的印记表达，应用亚硫酸盐方法分析了在该基因内部

5、的54个CG位点的等位基因特异的甲基化状态。结果显示，两条亲本链(A一链和G．链)均表现为高度甲基化(>96％)，并且链间甲基化水平无显著差异(P>0．05)，说明所分析位置的甲基化没有参与调控PEGll基因。分析PEGll基因体细胞核移植牛组织中的表达发现，PEGll基因在心、肝、脾、肾、肌肉和脂肪6个组织中都是单等位基因表达(G)，但是肺脏中发生印记紊乱。我们对表现为双等位基因表达(A／C)的肺脏进行等位基因特异的甲基化状态分析，在体细胞核移植牛中也呈现高甲基化状态，与自然繁殖牛无显著差异(P>0．os)，且两条链问无显著差异(P>O．05)，结果进一步证明PEGll基因内部

6、的DNA甲基化没有调控印记基因的表达。尽管DNA甲基化对印记表达没有调控作用，但是PEGII基因双等位基因紊乱表达也可能是造成体细胞核移植牛肺脏发育异常的原因之一。关键词：体细胞核移植；牛；PEGll；等位基因特异DNA甲基化；印记状态GenomicImprintingandDNAmethylationstatusofPEGllgeneinnaturallyreproducedandSCNTCattleMastercandidate：ShiYunjiaoMajor：BiochemistryandmolecularbiologySupervisor：ProfessorLiShale

7、AbstractSomaticcellnucleartransfer(SCNT)hasbeensuccessfullyappliedtomanymammalianspecies．However,manyofthosethatcandeveloptobirthoftendisplayavarietyoftheorganabnormalities．Itappearstobeagreatbarriertoefficientcloning．Theincompletereprogrammi