8brcamp联合顺铂作用于肺腺癌细胞a549的初步研究

《8brcamp联合顺铂作用于肺腺癌细胞a549的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、8BrcAMP联合顺铂作用于肺腺癌细胞A549的初步研究【摘要】目的：观察8溴环腺苷酸(8BrcAMP)联合顺铂(DDP)对人肺腺癌细胞A549生长及其表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响。方法：MTT法测定不同浓度8BrcAMP、DDP以及两药联用处理人肺腺癌细胞A549后细胞增殖活性的差异;应用RTPCR技术检测EGFRmRNA表达水平的变化;P及DDP均能抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,并呈浓度及时间依赖性;DDP联合8BrcAMP细胞抑制率显著高于相应浓度单药组(P<0.05),两者呈现出相加的抗瘤效果。8BrcAMP可下调

2、人肺腺癌A549细胞EGFRmRNA和蛋白的表达。8BrcAMP将细胞周期阻滞在G2/M期(P<0.05)。结论：8BrcAMP、DDP均可抑制A549细胞增殖。8BrcAMP可显著提高顺铂的细胞毒作用，增强化疗效果，并将细胞阻滞于G2/M期。8BrcAMP可以下调EGFR表达，可一定程度地逆转化癌细胞。【关键词】8溴环腺苷酸;肺腺癌细胞A549;表皮生长因子受体;蛋白激酶A　　[Abstract]Objective：Tostudytheeffectof8BrcAMPanpulmonaryadenocarcinomacellA549gr

3、oethodandfloetry.ThemRNAlevelsofEGFRinedbyRTPCR.TheproteinexpressionofEGFReanddosedependentmanner.paredol·L-1l-1,1μg·ml-1,2μg·ml-1,4μg·ml-1respectivelyincreasedthegroinistration(P<0.05).paredRNAandEGFRproteinsignificantlydecreasedinthe8BrcAMPgroupandbining8BrcAMPoreffectsonar

4、yadenocarcinmacell;epidermalgroalgroa公司)、DDP(山东齐鲁制药厂)、RPMI1640培养液(GIBCO公司)、胎牛血清(杭州四季青公司)、MTT(GIBCO公司)、DMSO(Sigma公司)、Trizol(Invitrogen公司)、逆转录试剂盒(Promega公司)、Taq酶(TaKaRa公司)、I1640培养液，在体积分数为0.05的CO2、37℃、饱和湿度的条件下培养。　　1.2.2四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖细胞以每孔5×103·(100μl)-1接种于96孔板，在含10%小牛血清的RPMI1640培养

5、液中培养24h，换为无血清培养基，24h细胞同步化后加入含不同浓度8BrcAMP、DDP及两者联合的培养基，对照组加等量培养基。8BrcAMP设4个浓度组，分别为10、15、20、25μmol·L-1;DDP设4个浓度组，分别为0.5、1、2、4μg·ml-1;取8BrcAMP的终浓度为15μmol·L-1分别与DDP0.5、1、2、4μg·ml-1两药联合。分别于培养24、48、72h后加入MTT液(5mg·ml-1)10μl37℃4h，弃上清，每孔加入150μl二甲基亚砜(DMSO)，待结晶物完全溶解后，于酶标仪492nm波长处，空白调零，测定各孔吸

6、光度(A)值，以A值为纵坐标，以时间为横坐标，绘制生长曲线。上述每种浓度复种3孔。按下式计算药物对细胞增殖的抑制率(IR)。IR=(对照组A值-实验组A值)/对照组A值×100%。联合用药对细胞增殖抑制率的计算用q值表示,q=R(A+B)[RA+(1-RA)/RB]。R(A+B)为两药A、B合用时对细胞的抑制率，RA为A药对细胞的抑制率，RB为B药对细胞的抑制率。若q值在0.85～1.15范围内表示两药作用相加，q值>1.15表明两药作用协同，q值<0.85则表示两药合用有拮抗作用。　　1.2.3RTPCR技术检测EGFRmRNA表达水平A549细胞经

7、RPMI1640培养液(空白组)、DDP2μg·ml-1(DDP组)、8BrcAMP20μmol·L-1(cAMP组)、DDP2μg·ml-1联合8BrcAMP20μol·L-1(联合组)体外孵育48h后，用Trizol试剂一步法提取细胞总RNA，按RTPCR试剂盒说明，在反应系统中加入总RNA2μg，42℃反应30min，99℃5min，5℃5min，1个循环。将mRNA逆转录成cDNA。以EGFR基因特异性引物进行PCR扩增，βactin为内参照。EGFR基因的引物序列为上游：5′CTTCTTGCAGCGATACAGCTC3′，下游：5′