香烟烟雾致BEAS-2B细胞恶性转化过程中基因组与PTPRM的DNA甲基化改变.pdf

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1、中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn香烟烟雾致BEAS-2B细胞恶性转化过程中#基因组与PTPRM的DNA甲基化改变**黄欢欢，纪雅慧，张佳玉，李建祥5（苏州大学医学部公共卫生学院，江苏苏州，215000）摘要：目的：探讨香烟烟雾致细胞恶性转化过程中基因甲基化改变及PTPRM甲基化改变对基因表达的影响。方法：以永生化人支气管上皮细胞（BEAS-2B）作为研究对象，建立细胞直接染烟的恶性转化的体外模型；利用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡改变；软琼脂克隆技术分析细胞恶性转化状态；检测恶性转化细胞中

2、全基因组甲基化的改变；采用Illumina450k10基因甲基化芯片检测恶性转化细胞中发生异常甲基化的基因；采用Realtime-PCR检测细胞中PTPRM基因表达改变和甲基化的影响。结果：染烟致恶性转化的细胞中细胞周期G1期明显缩短，S期延长，细胞处于增殖旺盛状态；随着染毒代数的增加，凋亡逐渐降低、克隆形成率逐渐上升；全基因组甲基化程度随着染毒代数增加逐渐下降；筛选出异常高甲基化的PTPRM基因，分析发现其mRNA表达随着恶性转化程度增加而逐渐降低,甲基化抑制剂155-AZA处理染烟细胞可以抑制其改变。结论：在香烟

3、烟雾可以致BEAS-2B细胞出现恶性转化，全基因组甲基化水平降低及基因的特异性高甲基化改变都起着关键的作用。关键词：香烟；BEAS-2B；DNA甲基化；PTPRM中图分类号：R114DNAmethylationincigarettesmoke-inducedmalignant20transformationincellsHUANGHuanhuan,JIYahui,ZHANGJiayu,LIJianxiang(SchoolofPublicHealth,SoochowUniversity,Suzhou215000)Abs

4、tract:ThisstudyaimtoinvestigatetheeffectofmethylationofwholegenomeandtheroleofPTPRMmethylationongeneexpressionduringmalignanttransformationofhumanbronchialepithelial25cells(BEAS-2B)cellsinducedbycigarettesmoke.Methods:Malignanttransformationcellmodelwasestablis

5、hedbyBEAS-2Bcellexposedtocigarettesmoke.Cellcycleandapoptosiswereinvestigatedbyflowcytometry.Softagarcolonyformationweredeterminedforanalyzingthecharacteristicsofmalignanttransformation.AberrantmethylatedgeneswereselectedbyIllumina450KDNAmethylationchip.Real-ti

6、mequantitativeRT-PCRwasusedtodetectthegeneexpressionofPTPRM.Results:Our30datashowthattheG1phaseofthecellcyclewassignificantlyshortened,whileitwasoppositeinSphase,andthecellswereproliferatedexuberantlyinthemalignanttransformedcells.Asconstantlyexposedtocigarette

7、smoke,theapoptosisrateandthelevelofgenome-wideDNAmethylationgraduaMethylationincigarettesmoke-inducedmalignanttransformationincellsllydecreased,whiletheclonalformationrateincreased.ThePTPRMgenewasscreenedoutfromtheIllumina450KDNAmethylationchip,35whichwasdecrea

8、sedongeneexpressionwiththeincreaseofmalignanttransformation.Methylationinhibitor，5-AZA,caninhibititschanges.Conclusion:Thedecreaseofgenome-wideDNAmethylationlevelandthespeci