胆红素致神经细胞损伤及全基因组dna甲基化水平变化的实验研究

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2、ｉｍａｒｙＣ山ｔｕｒｅＳｓｔｅｍｏｆｙＢｒａｉｎＣｏｒｔｉｃａｌＮｅｕｒｏｎｉｎＲａｔ研究生巧名韩东方学科？、专业公共卫生与预防医学劳动卫生与环境卫生学研巧方向环境毒理学．学位级别硕壬导师姓名、职称张本忠教授藥论文工作＇起止年月２０１３年１０月至２０１５年４月蘭驗Ｍｌ／论文提交日期２０巧年４月论文答辩日期２０１５年５月划’学位授予日期２０１５年６月ｊ－Ｖ’．：，縣．；＜職知酿＇校址：甘肃省兰脯气，至’媒松难＇巾＇．

3、＇＇占，古Ｖ、：，－；、１Ｉ、ＶＩ．Ｖ＇＂－：．Ｖ襄；；成说毫抑’’＇’：：ｉ－；；ＡｒＶ：杂Ｖ，Ｖ也原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人己经发表或未发表的成果、数据、观点等，。均己明确注明出处除文中己经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研巧成果做出重要贡献的个人和集体，均己在文中Ｗ明确方式标明。本声明的法律责任由本人承扭。论文作者签名：曰期讀７义多＾关于

4、学位论文使用授权的声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属兰州大学。本人完全了解兰州大学有关保存、使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部口或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权兰州大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用任何复制手段保存和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时一，第署名单位仍然为兰州大学。本学论文研究内容：公开□不宜公开，己在学位办公室办理保密申请，解密后适用本授权书。

5、＂＂一Ｖ（请在Ｗ上选项内选择其中项打）论文作者签名；导师签名：咬义气导曰期；曰期：如／主》胆红素致神经细胞扳伤及全基因组ＤＮＡ甲基化水平变化的实验研究中文摘要目的采用原代神经细胞培养技术，建立胆红素神经毒性模型，通过检测神经细胞结构损伤一、细胞活力、细胞内巧离子稳态变化和细胞调亡等观测终点，进步探讨胆红素所致神经毒性损害的特征，初步探讨胆红素染毒神经细胞全基因组ＤＮＡ甲基化水平的一变化，为进步探巧高胆红素血症致神经损伤的表观遗传学机制提供依据。方法（１）选取健康ＳＤ大贏新生鼠（２４ｈＷ内），体

6、外原代培养皮质神经细°胞ｅｕｒｏｂａｓａｌＩｎｖ虹ｏｅｎ）３７Ｃ，５％Ｃ０湿润恒温，选用Ｎ无血清培养基（ｇ，美国在２培养箱中培养细胞，ＳＥ免疫巧光法鉴定细胞种类（２）３ｄ的并利用Ｎ；培养细胞（Ｄ３）５、５０、１０〇Ｍ处理４、１２、２４、４８ｈ后经胆纽素２ｍ，通过ＭＴＴ法检测胆红素染毒后的细胞活力；（３）通过ＨＥ染色观察细胞病理结构变化；（４）利用Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２进行巧光标记，通过萊光显微镜观察胆红素诱导的细胞调亡情况；２＋（５－）利用Ｆ山０３巧光探针进行标记，通过蒙光显微镜检测细胞内Ｃａ浓度变化；（６ａｓｅ－

7、３）使用Ｃａｓｐ活性检测试剂盒（碧云天生物技术公司，中国）检测细胞内ｓａｓｅ－（）Ｔａｕ蛋白酶联免疫检疫试ｔＣａｐ３活性变化；７使用大鼠总剂盒（上海ＣｒｙｓａｌＴＤａｙＢｉｏｔｅｃｈ公司，中国）检测细胞内总ａｕ蛋白表达量的变化；（８）经胆红素系列浓度（０、２５、５０和ｌＯＯｐＭ）处理２４ｈ后，利用免疫巧光法检测细胞全基因组ＤＮＡ甲基化水平。结果（１）采用原代神经细胞无血清培养技术，建立了胆红素神经毒性模型；经ＮＳＥ免疫巧光检测，确定细胞为神经细胞；（２）神经细胞经胆红素染毒后，胞体减小，细胞核固缩，神经突变细、缩短

8、，神经节点减少，细胞间连接稀疏；３－，，细胞活力下降（）ＭＴＴ试验结果显示随着染毒剂量增加，呈剂量效应关系；同时，胆红素诱导的细胞活力下降也