酒依赖患者全基因组dna甲基化模式研究

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1、中图分类号R749UDC6lO博士学位论文学校代码!Q§兰圣密级公珏酒依赖患者全基因组DNA甲基化模式研究Genome．wideDNAmethylationpatternsstudyofalcohol—dependentpatients作者姓名：赵蓉蓉学科专业：临床医学研究方向：精神病与精神卫生学学院(系所)：湘雅二医院指导教师：郝伟教授答辩委员会主席中南大学2013年5月原创性声明l嗍嬲本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论

2、文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：一醚篮日期：知I∑年』月蔓日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据

3、库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。‘酒依赖患者全基因组DNA甲基化模式研究摘要目的：(1)利用全基因组DNA甲基化芯片(TheIlluminaInfiniumHumanMethylation450)，检测酒依赖(alcoholdependence，AD)患者及其未患病同胞全基因组水平DNA甲基化程度，筛选出两者之间甲基化程度具有差异的位点，探讨这些差异性位点所在基因甲基化状态和酒依赖之间的关联。利用焦硫酸测序技术，对某些甲基化程度差异性位点进行验证分析，比较芯片结果与焦硫酸测序结果的相关性，增加可信度。(2

4、)采用病例对照放大样本量分析高差异程度基因，初步了解表观遗传在酒依赖病理机制中的作用和意义。对象与方法：1．以精神障碍诊断与统计手册第四版(DiagnosticandStatisticalManualofmentaldisorder．IV，DSM．IV)轴I障碍定式临床检查(StructuredClinicalInterviewforDSM-IVAxisIDisorders，SCID．I)为诊断标准，将诊断为酒依赖者招募为病例组，并以酒精依赖性疾患识别测验量表(1heAlcoholUseDisordersIden

5、tificationTest，AUDIT)评定病例组酒依赖严重程度，应用生活事件量表(LES)、Wheatley应激量表了解负性生活事件及出现酒依赖的可能应激因素；以与病例组年龄、文化程度、地域相匹配的原则招募健康对照组；同时，在知情同意的基础上，选取酒依赖者家庭中一个尚未出现酒依赖(患病)状态的同胞纳入未患病同胞对组。本课题共招募两组研究对象。一组是AD及未患病同胞对10对，均为男性。另一组是病例组(63例)和健康对照组(65例)，均为男性。所有入组研究对象均IT来自新乡市市区及县区。2．抽取所有研究对象外周静

6、脉抗凝血8～lOml，利用DNA提取试剂盒(Qiagen，德国)提取各样本基因组DNA，并对基因组DNA进行亚硫酸转化处理及PCR扩增。利用全基因组甲基化芯片(TheIlluminaInfiniumHumanMethylation450)对10对AD同胞对进行基因组DNA甲基化检测分析并得出原始数据。3．运用BeadStudioMethylationModulev3．2软件分析数据。甲基化程度的高低依据扫描回馈结果averageBeta值(AVB，反映样本CpG位点甲基化程度，数值越大，越趋近于l，甲基化程度越高

7、)，根据lDiffScore]>20进行甲基化程度差异性位点的筛选。4．通过焦硫酸测序技术，利用10对同胞对(与全基因组DNA甲基化芯片检测分析对象相同)外周血DNA，检测GABRP、ALDHlL2、DBH、及GADl基因甲基化程度，并与芯片结果进行相关分析，观察芯片结果与焦硫酸测序结果的相符情况，验证芯片技术的可靠性。5．运用DatabaseforAnnotation，VisualizationandIntegratedDiscovery6．7(DAVID；http：／／abcc．ncifcrf．gov)、Ge

8、neOntology(GO；http：／／www．geneontology．or90和theKyotoEncyclopediaofGenesandGenomes(KEGG；http：／／www．genome．jp／kegg／)对差异性位点进行相关通路分析。6．通过焦硫酸测序技术，利用病例组(63例，不包括上述10对同胞对中的酒依赖患者)与健康对照组(65例)外周血DNA，