GBT30224-2013刚地弓形虫试验临床应用.pdf

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1、Ics11.100C50弱日中华人民共和国国家标准GB/T30224-2013刚地弓形虫试验临床应用ClinicaluseoftestsforToxoplasmagondii2013-12-31发布2014-12-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布中国国家标准化管理委员会GB/T30224-2013月U吕本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位：北京大学人民医院、首都医科大学友谊医院、首都医科大学附属北京朝阳医院。本标准主要起草人：张正、岳志红、赵晓涛、苏建荣、许淑珍、王

2、清涛。GB/T30224-2013刚地弓形虫试验临床应用范围本标准规定了刚地弓形虫临床实验室检验方法、标本的采集和处理、安全预防措施和免疫诊断试验的临床应用。本标准适用于开展刚地弓形虫检测的临床实验室。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。实验室生物安全手册（第三版）世界卫生组织2004年3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。刚地弓形虫Toxoplasmagondii弓形虫是法国Nicolle和Manceaux(190

3、8年）首先从非洲刚地梳趾鼠(Ctenodactylusgondii）体内单核细胞发现的，由于该虫的滋养体似弓形或半月形，故命名为刚地弓形虫。3.2弓形虫病toxoplasmosis由刚地弓形虫引起的一种人畜共患病，通过先天性和获得性两种途径获得感染。4检验方法刚地弓形虫病原学检查直接镜检用于直接观察寄生虫的标本包括分泌物、排泄物、体液和组织。液体标本应2000r/min离心10mmn,取沉淀制成显微镜涂片。经干燥、固定和Giemsa法染色后镜检，以发现速殖子、变性虫体。组织印片Giemsa法染色可检测到刚地弓形虫包囊，也可以检测到假包囊或速殖子。在少

4、数情况下，确诊弓形虫病依据病原学检查。2接种和组织培养将患者组织或体液接种于小鼠或组织培养细胞获得虫体或进行被接种动物的血清学检测。4.1.3抗原检测一酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)血清或体液中的循环抗原比特异性抗体出现早，是病原体存在的确证。可使用ELISA双抗体夹心1GB/T30224-2013法检测。4.1.4核酸检测为确定是否感染，可应用PCR技术检测虫体DNA。靶基因从Bi基因和AF146527序列等选取。血液、尿液、脑脊液、羊水、眼部体液和支气管灌洗液刚地弓形虫DNA检测阳性是

5、活动性感染的有力证据，但虫体DNA阴性并不能排除弓形虫病。4.2刚地弓形虫抗体检测4.2.1概述血清学检测刚地弓形虫抗体盔床实验室主要的诊断出确诊，需进行多种抗体联合检妇司翻嗓姗羁象哥从扣霭弧黯袱默可以作为确诊依据。刚地弓瑙方法中详细注意事项参见附录4.2.2刚地弓形虫侧限抗戳4.2.2.1IgG抗abFeldman染色试验（Sabin-Feldman』兰瓜薰孵啤育常如现的果于地弓形虫。出定r虫抗体，罗钵的细j伪脂难一'8周滴度达到高物考全防护明晦要求，因此’IgG啦体晌接血dj&ectheutinaIHA试验者血清和寥菊酒翻瞬可浮吸虫仲暇原降者体内

6、有刚地弓形虫抗，红阅！胞将凝集。IHA试红细胞质量和抗原的变化睡控：但篡鬓检测的4.2.2.3IgG抗姻瞬集咒直接凝集（direct魏lut翻肠on,DA)：血清经2-琉基乙醇处理，与经处创曹的速殖子孵育。如果患者体内有刚地弓形之生凝集。DA试验操作简便、乳胶凝集（latexagglutin,LA几瑟4o颗粒反应。’口果“刚地弓形虫抗体，则发生凝集。Lr伙脸躁作简便价廉，可用于呼呢虫IgG抗体筛查。由于非特异性1gM反应，可出现少量假阳性。一鉴别凝集（differentialagglutination,AC/HS)：比较丙酮处理（AC）速殖子和甲醛处

7、理（HS)速殖子的凝集反应有助于区别急性和慢性感染。急性感染患者血清标本可使AC和HS虫体悬液均凝集；慢性感染患者血清标本HS高滴度凝集，AC低滴度凝集或阴性。4.2.2.4IgG抗体一f]接荧光抗体试验（indirectfluorescentantibodytest,IFAIFA试验采用甲醛固定完整速殖子涂片，经空气干燥作为抗原。患者血清与抗原涂片孵育，加人荧光素标记抗人免疫球蛋白抗体。IFA已替代DT广泛应用。抗核抗体阳性患者可出现假阳性反应。对于每周筛查少于10份血清标本的临床实验室，IFA试验是理想的测定方法。.5IgG抗体一ELISAELI

8、SA是刚地弓形虫IgG抗体筛查应用最广泛的试验。可溶性抗原包被于固相载体；患者血清与GB/T30224-20