DB43T 860-2014 杂交水稻种子真实性和纯度鉴定SSR分子标记法

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1、ICS67.060B21DB43湖南省地方标准DB43/T860—2014杂交水稻种子真实性和纯度鉴定SSR分子标记法IdentificationofgenuinenessandpurityofhybridriceseedsbyusingSSRmarkers2014-02-13发布2014-03-01实施湖南省质量技术监督局发布DB43/T860—2014目次前言…………………………………………………………………………………………………Ⅱ1范围……………………………………………………………………………………………………1

2、2规范性引用文件………………………………………………………………………………………13术语和定义……………………………………………………………………………………………14原理……………………………………………………………………………………………………25主要仪器设备…………………………………………………………………………………………26主要试剂……………………………………………………………………………………………27分析步骤………………………………………………………………………………………………3附录A（资料性附录）试剂

3、配制……………………………………………………………………5附录B（资料性附录）PCR反应试剂配制…………………………………………………………7附录C（资料性附录）推荐使用的48对SSR引物在水稻基因组分布及其序列………………8参考文献………………………………………………………………………………………………10IDB43/T860—2014前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由湖南省水稻研究所提出，由湖南省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：湖南省水稻研究所、湖南省种子管理局。本标准起草人：詹

4、庆才、李稳香、朱克永、龚浩如、刘之熙、罗建军、熊伏星、陈祖武、陶曙华、陈英姿、曾曙珍。IIDB43/T860—2014杂交水稻种子真实性和纯度鉴定SSR分子标记法1范围本标准规定了杂交水稻种子真实性和纯度的SSR分子标记鉴定方法。本标准适用于杂交水稻种子及其植株真实性和纯度的鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T3543.4农作物种子检验规程发芽试验GB4404.1粮食作物

5、种子禾谷类GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1种子的真实性genuinenessofseed供试品种与国家长期库保存样本和数据库信息、新品种审定信息、新品种保护信息是否相符。3.2品种纯度varietalpurity本品种在特征特性方面典型一致的程度，用本品种的种子数占供检本作物样品种子数的的百分率表示。3.3变异株off-type一个或多个性状（特征特性）与原品种育成者所描述的性状显著不同的植株。3.4SSR标记simplesequencerepeat，SSR即简单

6、重复序列，又称微卫星序列或短串联重复序列，大多由1～5个核苷酸重复单位聚集而成的一般长达100～200个碱基的串联重复序列。3.5聚合酶链式反应polymerasechainreaction，PCR一种在体外大量扩增目的基因或特定DNA片段的分子生物学技术，该技术以短核苷酸序列作为引物，并使用一种耐高温的DNA聚合酶，只需非常少量（通常在纳克级范围内）的DNA样品，在短时间内以样品DNA为模板合成上亿个拷贝。1DB43/T860—20144原理SSR真实性鉴定是利用分布在12条染色体上48对SSR引物，扩增标准样品与送检

7、样品DNA，比对同一SSR位点处DNA序列扩增谱带的多态性，鉴定送检样品真实性。SSR纯度鉴定是选用双亲互补型引物，利用SSR标记的共显性特征，对送检样品的DNA进行扩增，根据产生的父母本互补谱带的位置，鉴定送检样品的纯度。5主要仪器设备5.1PCR扩增仪5.2紫外凝胶成像系统5.3电泳仪：最高电压≥2000V,最大功率≥100W5.4水平电泳槽及配套的灌胶附件5.5微量可调移液器：规格分别为10μL、200μL、1000μL连续可调5.6低温冰箱：最低温度﹣20℃5.7高压灭菌锅：120℃±2℃5.8恒温水浴锅：温控精

8、确度±1℃5.9光照培养箱：控温范围10～60℃5.10冷冻离心机：最大离心力≥20000g5.11电子天平：分度值≤0.01g6主要试剂除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，所有水符合GB/T6682中规定的三级以上水的要求。相关试剂配制要求见附录A。6.1DNA提取试剂盒Ⅰ6.2DNA提取试剂盒Ⅱ6.32xCT