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1、郭承亮，男，(1982-)，湖北黄冈人，硕士研究生，毕业于华中农业大学，现主要从事种子质量检测和分子标记辅助育种等研究。E-mail：51097143@qq.com。SSR分子标记在杂交稻种子纯度精确鉴定中的应用郭承亮(湖北省种子集团有限公司武汉430602）摘要：传统的田间小区种植纯度鉴定方法由于时间滞后不能满足种子企业的需求，而现有的SSR标记检测杂交水稻种子纯度的方法，虽能有效鉴定出杂交种的父、母本，但不能将一些混杂的杂株、串粉所致的杂交种区分开，也无法满足种子企业的全面质量信息需求。本文结合自身工作实践，介绍了一种利用筛选的多
2、对SSR分子标记深入检测杂交水稻种子纯度及开展杂株类型定量鉴定的方法，这种方法不仅能更精确的检测杂交水稻种子纯度，还能将种子所含的杂株类型及其各自占比鉴定出来，为种子企业提供更准确、更全面的质量信息和可操作性强的加工处理办法。本方法广泛适用于各种子企业对主营骨干水稻品种的质量监控和生产经营决策。关键词：SSR分子标记纯度鉴定杂株类型定量鉴定纯度是种子质量的核心指标，既是种子企业生存的根本，也是企业种子加工、销售决策的关键依据。种子纯度检测主要有海南种植鉴定（以下简称“南鉴”）、正季种植鉴定（以下简称“正鉴”）以及SSR分子标记鉴定等方
3、法。这三种方法各有特点：南鉴和正鉴是以田间小区种植方式，从植株的典型特性判别、鉴定种子纯度。南鉴具有鉴定相对准确、时间相对提前的优点，但海南冬季属短日低温条件，感光类型及两系不育系均表现为正常结实，对杂交稻尤其是两系杂交稻种子纯度的鉴定结果往往失真；正鉴具有鉴定准确、鉴定结果与大田生产实际吻合度高的优点，但时间明显滞后。从历年发生的重大种子纯度事故来看，绝大多数是在得知种子纯度不合格之前种子已经销售到千家万户无法召回，最终酿成无法挽回的损失。SSR分子标记是从DNA水平上检测生物个体差异，具有多态性高、谱带扩增稳定、技术成熟、检测时间
4、短、不受环境影响等特点，9在杂交水稻种子纯度鉴定研究中得到了越来越广泛的应用[1]。本文详细介绍了SSR分子标记在杂交稻种子纯度及杂株类型定量鉴定中的应用，为种子企业在杂交稻种子纯度的检测上提供更精确的鉴定方法。1SSR分子标记的原理、特点及在杂交水稻纯度鉴定中的应用现状1.1SSR分子标记的原理SSR也称为微卫星DNA(microsatelliteDNA)、短串联重复(tendom-repeats)或简单序列长度多态性(simplesequencelengthporlymorphism)，它通常是指基因组中由1～6个核苷酸组成的基本
5、单位重复多次构成的一段DNA,广泛分布于基因组的不同位置,长度一般在200bp以下,相同座位上的重复序列由于重复次数不同而产生了等位基因的多态性，SSR引物就是根据这些区域串连数目的差异造成的多态性设计而成的[2-5]。1.2SSR分子标记的特点SSR分子标记广泛、随机、均匀分布于作物基因组，参与遗传物质结构的改变、基因调控等过程，直接反映种子遗传物质在DNA水平上的差异。具有以下几个特点：1、准确性高、数量丰富，覆盖整个基因组，提供的信息量高；2、多态性好，多数SSR序列无功能作用,增加或减少几个重复序列的频率高,因而在品种间具广泛
6、位点变异,多态性强；3、重复性好,使用简单,结果稳定；4、SSR标记两侧的序列具有高度的保守性,它使我们可以在一个物种的微卫星研究中利用另一物种的研究结果,从而更快更准确地找到该物种中更多的SSR9位点，每个位点由设计的引物顺序决定，便于相互交流、合作开发引物；5、属共显性遗传，符合孟德尔式遗传定律，不易被自然选择和人工选择所淘汰；6、易于利用PCR技术分析，分析简便,所需DNA样品量少，仅需微量组织就能进行有效地分析鉴定，经济简便；7、不受季节、环境的影响，并且鉴定的时间快。1.3SSR标记在杂交稻纯度鉴定上的应用现状彭锁堂等[2]
7、选用分布于水稻12条染色体上的26对引物对9个杂交稻组合及其亲本进行了SSR分析,能够有效地区分所有的恢复系和大部分不育系,并对杂交稻组合汕优63和两优培九进行了单粒种子SSR鉴定,所测纯度与田间种植鉴定纯度非常接近,认为SSR标记适合于杂交水稻种子纯度鉴定；辛业芸等[3]应用SSR分子标记技术对5个超级杂交稻组合及其9个亲本进行鉴定,找到在杂交稻组合及其亲本间具有多态性的引物,筛选出5对引物分别作为鉴定这5个超级杂交稻组合的特异引物；詹庆才等[4-5]利用多态性好的两对SSR标记引物分别对参试的威优46和金优207进行了纯度鉴定,能
8、有效地将掺假的种子与真种子区分开；通过进一步研究，优化了利用SSR分子标记快速鉴定杂交水稻种子纯度的技术体系,缩短了检测时间，推进了该技术在杂交水稻种子纯度鉴定中的应用。当前，SSR分子标记技术已广泛应用于杂交水稻种子纯
