酵母富硒工艺优化研讨分析

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1、酵母富硒工艺优化研讨分析　　摘要：本文通过正交试验，对酵母富硒工艺进行了优化。结果表明：酿酒酵母具有较强的富硒能力。在适宜的条件下，以YEPD为培养基、加硒量16mg/L、8%的接种量、28℃培养30h，有机硒含量可达12.39mg/L、转化率为82.62%. 关键词：酿酒酵母；富硒；优化研究 　　硒是人体生命中不可缺少的微量元素之一，在人体内总含量为14~20毫克，广泛分部于所有组织器官中，浓度高者有肝、胰、心、脾、牙及指甲，而脂肪组织中浓度最低，它对人体的正常代谢起着重要的调节作用，因而被喻为“生命火种”、“抗癌之星”。 　　同时硒是一种稀散元素，不同地区食物中的硒含量不同，这与地理环境中

2、的硒含量有关，在世界27个国家及美国几十个洲的流行病理学调查研究结果表明：土壤、食品、水中的含硒水平越低，癌症及心脑血管疾病的发病率及死亡率越高。硒是构成谷胱甘肽过氧化物酶的成份，参于辅酶A和辅酶Q的合成，是良好的营养调节剂、抗氧化剂、对抗金属的解毒剂，缺“硒”将会导致40多种疾病的发病率增高。然而自然界的“硒”在地壳中的含量极低，且与其它元素共生，人体难以吸收，全世界共有40多个国家缺硒，我国缺硒省份高达22个。 　　目前国内外盛行用无机硒作为补硒制品，如亚硒酸钠片剂。但是无机硒与有机硒相比，有生物活性低而毒副作用大，且不易吸收等问题。针对我国缺硒现象是普遍存在的这一现状，如能通过每天摄入一

3、定量的富硒食品即能达到理想的补硒效果，从而实现强身健体、延长寿命的作用己成为目前功能性食品研究的迫切课题之一。在研究众多的富硒制剂和食品添加剂中，酵母经富硒培养后得到的富硒酵母，因其自溶物中有机硒含量高，同时还含有丰富的氨基酸、核苷酸、多肽、蛋白质和一些微量元素与维生素，可作为良好的富硒食品的添加剂而倍受重视。而如何获得含硒量高的酵母是一个重要的前提，本文研究了酿酒酵母1605富硒工艺的优化。 １材料与方法 1.1材料 1.1.1菌种酿酒酵母1605。 1.1.2培养基 　　YEPD培养基葡萄糖２％，蛋白胨２％，酵母膏１％，自然PH值，固体加２%琼脂、121℃灭菌15分钟。 　　麦芽汁培养基自

4、制麦芽汁10º，pH=6.0。 加入的硒均单独灭菌。 1.1.3试剂 　　0.2mol/LEDTA-2Na；5%NaOH；0.5%３、３′-二氨基联苯胺；甲苯；1:1HCl；1μg/ml硒标准溶液等。 1.1.4仪器 　　722S分光光度计；LRH－150B生化培养箱；SW-CJ-1F超净工作台；DSX－280A不锈钢手提式消毒器；TGL-16G高速台式离心机；101-2型干燥箱等。 1.2方法 菌种活化→驯化 ↓ 　　培养基配制→发酵培养→发酵液分离→清洗→新鲜硒酵母→干燥(100℃，5h)→富硒酵母↓ 　　取上清液→硒含量测定→计算酵母硒含量及有机硒转化率 1.2.1菌种活化、驯化 　　

5、将少量固体原种接入YEPD液体培养基中，在28℃培养25小时，后再转接入加有适量硒的YEPD液体中进行驯化培养。 1.2.2富硒工艺优化 　　首先通过预备试验确定因素和水平，然后通过正交试验确定其最优化工艺条件。 1.2.3酵母产量的测定 　　将待分离发酵液用高速离心机4000rpm离心20分钟，分成两部分，上清液取出备后续测定使用，下层酵母沉淀用无菌水清洗两遍，得新鲜湿酵母。将湿酵母置100℃的烘箱内干燥至恒重。 　　1.2.4酵母中硒含量的测定及富硒能力(有机硒转化率)计算-3，3′-二氨基联苯胺比色法 1.2.4.1测定原理 　　在PH２~３条件下，硒与3、3′－二氨基联苯胺反应形成稳定

6、的Se-DAB络合物，显色反应在30分钟内完成。在PH6左右时，通过甲苯萃取，在该体系中络合物最大吸收波长为420nm。可通过分光光度计测定其吸光度，先绘制出标准硒曲线，然后再测出样品吸光度，可从该标准曲线上查出对应的硒含量。 1.2.4.2硒标准溶液 　　准确称取0.1000g硒，置于50ml小烧杯中，力入1:1盐酸10ml,加热溶解，冷却并转移至100ml容罱瓶中，用10％硝酸溶液洗小烧杯合并沈液于容帚瓶中，并用10％硝酸稀释至刻度。此溶液每毫升含1毫克硒，用时可稀释成每毫升含1微克硒。 1.2.4.3标准曲线绘制 　　准确吸取1μg／ml硒标准液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、1

7、0.0ml，分别移入分液漏斗中，加水至35ml。分别加入5％EDTA-2Na溶液1ml，摇匀，用1:1盐酸调节pH2-3左右，各加0.5％3，3′-氨基联苯胺溶液4ml，摇匀，置于暗处30分钟，再用5％氢氧化钠溶液调节至中性，加10ml甲苯振摇2分钟，静置分层，弃去水层，甲苯层通过棉花栓过滤于比色皿中，于420nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线(见图1)。 1.2.4.4残留无机硒含量的测定