biorad亲和纯化柱问题

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1、BIORAD纯化介质（ProfinityIMACResins）纯化蛋白2011年1月10日用BIORAD亲和层析纯化柱纯化蛋白后发现蛋白不能与柱子稳定偶联，蛋白在各个浓度的咪唑浓度下均能被洗脱。具体操作步骤如下：1.用含有8M尿素的缓冲液PH7.51:10(w/v)重悬包涵体,超声波裂解，置于4℃上1h离心,10000g,10min,离心取上清2.用0.45μm过滤器过滤上清。3.5V的BindingBuffer（含尿素）平衡柱子，1ml/min4.上样5.10V的WashBuffer洗去未结合的样品6.5VElutionBuffer洗脱样品（50mM、10

2、0、250、500咪唑）7.10VBindingBuffer（含尿素）平衡柱子，停止取样8.10V水洗柱子1-2：为上样前样品3：为流穿4-6：为washbuffer(10mM咪唑)过柱7-8：为50mM咪唑洗脱9-10：为100mM咪唑洗脱11-12：为250mM咪唑洗脱13：为500mM咪唑洗脱