4%多聚甲醛溶液的配制方法

《4%多聚甲醛溶液的配制方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、4％多聚甲醛溶液配制方法--------------------------------------4％多聚甲醛溶液用途：进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。动物灌注固定及后固定（动物器官经该液灌注后，然后取材，再用该液浸泡2-24小时）也常选该固定液固定。4％多聚甲醛溶液配制方法：1)900mlddH20+500ul1NNaOH2)Heatto65-70℃3)Whilestirring,add40gparaformaldehyde4)Continueheatingandstirringuntilparaformaldehydeisdissolved5)Letcoolt

2、oroomtemperature6)Add100mlof10XPBS7)pHto7.3withHCl8)Sterilewithfilter9)Storeat4℃,protectedfromlight称量2g，放置与50mlpbs中，37度孵箱2天后，4%的多聚甲醛就配好了。配制0.1M的PBS，PH=7.2-7.4,100mlPBS+4g多聚甲醛，放入65℃水浴，一般半天左右就可以溶好。因为需要现用现配所以一般就配10毫升。用一个带盖的玻璃离心管加0.4克多聚甲醛，加8毫升PBS，加1毫升2N的NAOH，放到60度的水浴里，10分钟，拿出来用手颠倒几次，基本上就都溶了，再用H

3、CL调ph到7.2，最后定容就行了，我最快10分钟搞定。取4g多聚甲醛溶到100PBS缓冲液，加2滴1N的NaOH（pH7.4）,60度水浴磁力搅拌，大约1-2小时可以溶解。4%多聚甲醛溶液的配制:在放置磁力搅拌棒的容器中,将4克多聚甲醛(EM级)溶解于100mlPBS,加入数滴NaOH,在通风橱中60℃加热(打开瓶盖)使溶解,冷却至室温,调整PH值为7.4,使用前新鲜配制.常用的固定剂种类很多,固定剂的正确选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的特性.固定剂可分为两类:有机溶剂和交联剂.有机溶剂如乙醇和丙酮能够去处脂类物质使细胞脱水,把蛋白质沉淀在细胞结构上.交联剂如多聚甲醛

4、一般通过自由氨基基团把生物分子桥连起来,形成一个相互交联的抗原网.许多人发现用交联剂固定细胞效果较好,尤其是做免疫荧光的时候,当然没有固定的规则可言.不过,单独用多聚甲醛固定的细胞不能使抗体进入细胞内,因此,标本固定后必须用非离子去污剂(triton-x100)透化标本.4％多聚甲醛溶液（PFA）配制称取40gPFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60－65℃,使成乳白色悬液。用1.0mmol/L的NaOH调PH至7.0使呈清亮状（滴加），再加入约500ml2×PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中）。可再检测一下PH，过滤后定容至100

5、0ml，室温或4℃（保存备用）。注意：1.配制时应在通风条件下操作，并避免接触皮肤及吸入（戴口罩及手套），因PFA有较强的毒性，对粘膜及皮肤有刺激作用。2.加热时，温度不可过高，常为60－65℃。否则PFA降解失效，配制好的PFA虽可有效一点时间，但过久的液体，固定效果下降，应用前新鲜配制。除了用DEPC水配制PFA外，也可以用灭菌蒸馏水或经DEPC或外源RNA酶清除剂处理的0.01－0.1％/L的PBS配制，方法及主要事项同上。