4%多聚甲醛溶液的配制方法

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时间:2018-01-05

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1、4%多聚甲醛溶液配制方法--------------------------------------4%多聚甲醛溶液用途:进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。动物灌注固定及后固定(动物器官经该液灌注后,然后取材,再用该液浸泡2-24小时)也常选该固定液固定。4%多聚甲醛溶液配制方法:1)900mlddH20+500ul1NNaOH2)Heatto65-70℃3)Whilestirring,add40gparaformaldehyde4)Continueheatingandstirringuntilparaformaldehydeisdissolved5)L

2、etcooltoroomtemperature6)Add100mlof10XPBS7)pHto7.3withHCl8)Sterilewithfilter9)Storeat4℃,protectedfromlight称量2g,放置与50mlpbs中,37度孵箱2天后,4%的多聚甲醛就配好了。配制0.1M的PBS,PH=7.2-7.4,100mlPBS+4g多聚甲醛,放入65℃水浴,一般半天左右就可以溶好。因为需要现用现配所以一般就配10毫升。用一个带盖的玻璃离心管加0.4克多聚甲醛,加8毫升PBS,加1毫升2N的NAOH,放到60度的水浴里,10分钟,拿出来用手颠倒

3、几次,基本上就都溶了,再用HCL调ph到7.2,最后定容就行了,我最快10分钟搞定。取4g多聚甲醛溶到100PBS缓冲液,加2滴1N的NaOH(pH7.4),60度水浴磁力搅拌,大约1-2小时可以溶解。4%多聚甲醛溶液的配制:在放置磁力搅拌棒的容器中,将4克多聚甲醛(EM级)溶解于100mlPBS,加入数滴NaOH,在通风橱中60℃加热(打开瓶盖)使溶解,冷却至室温,调整PH值为7.4,使用前新鲜配制.常用的固定剂种类很多,固定剂的正确选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的特性.固定剂可分为两类:有机溶剂和交联剂.有机溶剂如乙醇和丙酮能够去处脂类物质使细胞脱水,

4、把蛋白质沉淀在细胞结构上.交联剂如多聚甲醛一般通过自由氨基基团把生物分子桥连起来,形成一个相互交联的抗原网.许多人发现用交联剂固定细胞效果较好,尤其是做免疫荧光的时候,当然没有固定的规则可言.不过,单独用多聚甲醛固定的细胞不能使抗体进入细胞内,因此,标本固定后必须用非离子去污剂(triton-x100)透化标本.4%多聚甲醛溶液(PFA)配制称取40gPFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器(烧杯或烧瓶)中,持续加热磁力搅拌至60-65℃,使成乳白色悬液。用1.0mmol/L的NaOH调PH至7.0使呈清亮状(滴加),再加入约500ml2×PBS,充分混匀(

5、在冰浴或冷水浴中)。可再检测一下PH,过滤后定容至1000ml,室温或4℃(保存备用)。注意:1.配制时应在通风条件下操作,并避免接触皮肤及吸入(戴口罩及手套),因PFA有较强的毒性,对粘膜及皮肤有刺激作用。2.加热时,温度不可过高,常为60-65℃。否则PFA降解失效,配制好的PFA虽可有效一点时间,但过久的液体,固定效果下降,应用前新鲜配制。除了用DEPC水配制PFA外,也可以用灭菌蒸馏水或经DEPC或外源RNA酶清除剂处理的0.01-0.1%/L的PBS配制,方法及主要事项同上。

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