dna的溶液配制方法

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1、1.0.5mol/LEDTA配制组分浓度：0.5mol/lEDTA，PH=8配制量：500ml配制方法(1)称取93.06克EDTA.Na2.2H2O，置于500ml烧杯中  (2)加入约400mlddH2O.用热磁力搅拌器充分搅拌  (3)用NaOH调节PH值到8，约用10克固体NaOH  (4)在溶液冷却后，再用NaOH调节至PH=8  (5)加ddH2O将溶液定容到500ml  (6)高温高压灭菌后，室温保存2.NaOH溶液的配制组分浓度：5mol/lNaOH配制量：100ml配制方法(1)称取固体NaOH20克于容器中(2)加入ddH2O定容到100ml3.10

2、0mmol/lTris-HCl的配制组分浓度：mmol/lTris-HCl，PH=6.4配制量：250ml配制方法(1)称取3.025克Tris于250ml烧杯中.  (2)加入约200mlddH2O充分搅拌溶解.  (3)用浓盐酸调节PH值到6.4.所用浓盐酸约3ml  (4)将溶液定容至250ml  (5)用棕色瓶分装于4度冰箱中  (6)如使用，用水浴加热溶解.4.氯仿-异戊醇的配制：配制方法(1)简单的体积混合，既要求比例为24：1即可  (2)储存于棕色玻璃瓶子中  (3)置于4度冰箱以便日后使用5.去污剂：CTAB：可将细胞膜裂解，使DNA释放到提取液中，同

3、时也使组织匀浆中的蛋白质变性.EDTA：能与DNase的辅助因子Mg2+结合，使DNase失去活性，不能降解从细胞中释放的DNA.6.还原剂巯基乙醇：它抑制从细胞中释放的多酚氧仿.防止植物组织发黄变褐.7.氯仿—异戊醇：它可把组织匀浆中变性的蛋白质除去，将DNA与细胞中的蛋白质、碳水化合物等分开除去.8.RNase：它可去除核酸中的RNA，只留下DNA.9.硅珠悬浮液的配制（1）称取1.2g硅珠粉，溶解于10ml无菌水中.（2）放入4℃冰箱备用.（3）使用时先涡旋使其混合均匀10.    10×TE，500ml配制如下：将100mMTris-Hcl（PH=8.0）6.0

4、57g与10mMEDTA（PH=8.0）1.8612g溶于400ddH2O中，调PH=8.0，定容到500ml。11.    1×TEBuffer组成浓度：10mMTris-HCl  1mMEDTAPH=8.0配制量：500ml配制方法：量取下列溶液于500ml烧杯中    1MTris-HCl  BufferPH=8.0  5ml    0.5MEDTA    PH=8.0  1ml    向烧杯中加入约400mlddH2O均匀混合；将溶液定容到500ml后，高温高压灭菌；室温保存.12.    聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGEPAGE操作流程及注意事项：1、涂胶1）将有耳

5、玻片（耳朝下）泡于反硅化剂中，新液25分钟，旧液30分钟.2）涂无耳正面玻片硅化剂.均匀点四滴，轻而匀的沿一个方向涂三次，静10分钟.3）到时间取出.打开通风橱风干30分钟.2、封胶1）将两玻片对贴于橡胶框中，放平，用力拧死，夹住橡胶管.2）溶废琼脂胶，分两次：第一次50秒，第二次10-20秒，防止沸出.3）用小细长枪头通透加胶枪头，便于加样通畅，少起气泡.4）吸2500-3000ul液胶加速沿玻片边缘快速顺下滴，将两面玻片充分封死，防止漏胶.以水平底线面水平高于底为佳，静止凝胶15分钟.（有时可先在封口加一点TBE以润滑玻片，利于胶流下）3、灌胶1)用长细枪头透开加胶

6、枪头2)从中间加入，每次不要全部打完，留一点在枪头内.防止断流而导致胶中含有气泡.3)插梳子时两端平整，梳子紧贴玻板，梳齿头部不可有气泡.4)拔梳子时先加一倍TBE液将梳子泡透，然后平行用力拔出.5)在插梳子15分钟内跟踪观察，适当下按，保证孔的深度.6)等待2小时，以便胶充分凝固.4、吹孔1）向中间槽加入1倍粗制TBE，要淹没过内玻片约1厘米.2）拔梳子，小心平稳，均匀平衡.3）调1000p枪到300-600ul，进行吹孔，将小孔内沉淀物吹打干净，加样中再视时吹5、加样1）用细长专用枪加入DNA0.5ul.2）一手托另一臂的肘，以保证加样手不抖.3）一定垂直加到孔中去

7、，不脱尾，不吸水，不靠壁，干净利落.4）加完一次.在放于桌旁的吸纸上，将细枪头上余液吸干.5）首、中、尾各留1到2个孔，两面胶孔的Marker不完全一样，以便区分.6）加Marker0.15ul一般取0.3ul每孔注如一半，可用两个孔.6、跑胶1)向两侧槽中加入粗制TBE，至U管线处.2)打开电源，稳压到120V3)电泳2h左右4)当样品跑到底部2cm处，关闭电源.7、撬玻片1）刀片不伸入过深.刀片平行于玻片，稍用力.2）将没有硅化剂的无耳玻片放于水盘中，还有梳子.3）清理琼脂胶，放于烧杯中.4）胶玻片放于盘中，银染.13.    2、T