MMFSCNG婴幼儿配方食品和乳粉维生素ADE的测定.docx

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1、MMFSCNG02婴幼儿食品乳粉维生素A维生素D维生素E液相色谱法MM_FS_CNG_0216婴幼儿配方食品和乳粉维生素ADE的测定1.适用范围本方法适用于各种婴幼儿配方食品和乳粉中维生素A、DE的测定。2.原理概要样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离，经（用）石油醚萃取后，用高压液相色谱，紫外检测器定量测定。3.主要试剂和仪器.主要试剂高峰氏淀粉酶（Taka-Diastase）。焦性没食子酸的乙醇溶液：15g/L。氢氧化钾溶液：质量比为100:50。石油醚：沸程30〜60C。甲醇、正己烷、异丙醇、环己烷：色谱纯。维生素AE标准溶液：维

2、生素A标准贮备液（含维生素A100yg/mL的甲醇溶液）：称取10mg的维生素A,用甲醇定容于100mL容量瓶中。维生素E标准贮备液，含维生素E400卩g/mL的甲醇溶液：称取40mg的维生素E,用甲醇定容于100mL容量瓶中。维生素A、E标准工作液，其中维生素A的浓度为2卩g/mL,维生素E的浓度为20卩g/mL：取1mL维生素A标准贮备液和维生素E标准贮备液于50mL容量瓶中，用甲醇溶解。维生素D标准溶液：维生素D2标准贮备液，含维生素D100ug/mL的甲醇溶液：称取10mg的维生素D2,用甲醇定容于100mL容量瓶中。维生素D3标准

3、贮备液，含维生素D3100卩g/mL的甲醇溶液：称取10mg的维生素D,用甲醇定容于100mL容量瓶中。维生素D标准工作液，其中维生素C2、维生素D3的质量浓度均为1卩g/mL：取维生素D2标准贮备液1mL,维生素D3标准贮备液1mL于100mL容量瓶中，用甲醇定容。.仪器250mL平底烧瓶、500mL分液漏斗、旋转蒸发器。高压液相色谱仪：具有可变波长的紫外检测器、数据处理系统或记录仪。4.过程简述.样品处理含淀粉的样品：准确称取10g样品放入250mL平底烧瓶中，加入IgTaka淀粉酶，再加入30mL4〜50°C的蒸馏水，混合均匀后，用氮

4、气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置45C烘箱内30min。不含淀粉的样品：准确称取10g样品，置于250mL平底烧瓶中，加30mL蒸馏水。.测定液的制备于上述处理过的样品溶液中加入100mL的没食子酸乙醇溶液，充分混匀后加50mL氢氧化钾溶液，在蒸汽浴上连续回流30min后，立刻冷却到室温。将皂化液转入一500mL分液漏斗中，用100mL水分几次冲洗平底烧瓶，洗涤液并入分液漏斗中。于上述分液漏斗中，加入100mL石油醚，盖好瓶塞，倒置分液漏斗并剧烈振摇1min。在振摇过程中，注意释放瓶内压力。静置分层，将水相放入另一500mL分液漏斗中。重复上述

5、萃取过程二次，合并醚液到第一个分液漏斗中。用蒸馏水洗该醚液至中性，通过无水硫酸钠过滤干燥，在40°C和氮气流下，于旋转蒸发器上蒸至近干（绝不允许蒸干）后，用石油醚转移至10mL容量瓶中，定容。从上述容量瓶中取2mL石油醚溶液放入试管A中，再取7mL石油醚溶液放入另一试管B中，分别用氮气将试管A和B中的石油醚吹干，石油醚溶液放于A中加5mL甲醇，用来测定维生素A、E,试管B中加1mL正己烷，用来测定维生素D。.测定维生素A和E的测定仪器条件：色谱柱：25cmX,ODSi或具等同性能的色谱柱。流动相为甲醇。流速为min。灵敏度为MV维生素A波长

6、为325nm维生素E波长为290nm注射50卩L维生素A、E标样和50卩L样品溶液，得到标样和样品溶液中维生素A和E的峰高或峰面积。维生素D的测定.测定液的制备a）仪器条件：色谱柱为30cmK4mm的硅胶柱。流动相为环己烷与正己烷按体积比1:1混合，并按体积分数％加入异丙醇。流速为1mL/min。波长为265nm柱温为20C。灵敏度为MV注射体积为200卩L。b）注射50卩L维生素D标样和200卩L样品溶液（试管B中），根据维生素D标样保留时间收集维生素D于试管C中，将试管C用氮气吹干，准确加入甲醇溶解。.测定步骤a）仪器条件：色谱柱25c

7、mx，C*或具等同性能的色谱柱。流动相为甲醇。流速为1mL/min。柱温为20C。波长为265nm灵敏度为MU注射体积为50卩L。b）注射50卩L维生素D标准溶液，注射50卩L样品溶液（试管C中），得到标样和样品溶液中维生素D峰面积或峰高。1.结果计算样品中维生素A（IU/100g）CsX10/2X5XX100样品中维生素E（IU/100g）mCsX10/2X5X100(1)样品中维生素D（IU/100g）mCsX10/75X100X40mX1000Cs~"XCsd…Ad式中：Cs――进样液中维生素A、E或D的质量浓度，卩g/mL；m样品的

8、质量，g；As进样液中维生素A、E或D的峰高（或峰面积）;Asd——标样中维生素A、E或D的峰高（或峰面积）;Csd标样中维生素A、E或D的质量浓度，卩g/mL。计算结果精确至小