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《GBT5413.9-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素A、D、E的测定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、GB/T5413.9-1997前言测定维生素A,D,E的方法很多，但广为采用的是高压液相色谱法，方法快速、准确，并避免了三种成分的相互干扰。本标准由中国轻工总会提出。本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位:国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位:卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢(中国)投资服务有限公司。本标准主要起草人:杨金宝、王芸。中华人民共和国国家标准婴幼儿配方食品和乳粉Gs/T5413.9-1997维生素A,D,E的测定Milkpowderandformu
2、lafoodsforinfantandyoungchildren-DeterminationofvitaminA,D,Econtent1范围本标准规定了用液相色谱法测定维生素A,D,E的方法。本标准适用于各种婴幼儿配方食品和乳粉中维生素A,D,E的测定。2方法提要样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离，经(用)石油醚萃取后，用高压液相色谱，紫外检测器定量测定。3试荆所有试剂，如未注明规格，均指分析纯;所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1高峰氏淀粉酶(Taka-Diastase),3.2异丙醉:色谱纯。3.3
3、焦性没食子酸的乙醇溶液:15g/L,3.4氢氧化钾溶液:质量比为100150,3.5石油醚:沸程30^-600C,3.6甲醇:色谱纯。3.7正己烷:色谱纯。3.8环己烷:色谱纯。3.9维生素A,E标准溶液3.9.1维生素A标准贮备液，含维生素A100t,g/mL的甲醇溶液。称取10mg的维生素A，用甲醉定容于100mL容量瓶中。3.9.2维生素E标准贮备液，含维生素E400kg/mL的甲醇溶液。称取40mg的维生素E，用甲醉定容于100mL容量瓶中。3.9.3维生素A,E标准工作液，其中维生素A的浓度为2pg/mL，维生素
4、E的浓度为201,g/mLa取1mL维生素A标准贮备液(3.9.1)和2.5mL维生素E标准贮备液(3.9.2)于50mL容量瓶中，用甲醉溶解。3.10维生素D标准溶液3.10.，维生素D:标准贮备液，含维生素D,100pg/mL的甲醇溶液。称取10mg的维生素D,，用甲醇定容于100mL容量瓶中。3.10.2维生紊D,标准贮备液，含维生素D,100Kg/mL的甲醇溶液。国家技术监件局1997一05一28批准1998一09一0，实施GB/T5413.9-1997称取Iomg的维生素D3，用甲醇定容于100mL容量瓶中。3.
5、10.3维生素D标准工作液，其中维生素Dz、维生素D:的质量浓度均为lag/mL,取维生素D:标准贮备液1mL,维生素D3标准贮备液ImL于l00mL容量瓶中，用甲醇定容。4仪器常用实验室仪器及:4.1平底烧瓶:250mLa4.2分液漏斗:500mL,4.3旋转蒸发器。4.4高压液相色谱仪:具有可变波长的紫外检测器、数据处理系统或记录仪。5操作步骤5门样品处理5.1.，含淀粉的样品准确称取log样品，放人250mL平底烧瓶中，加人1gTaka淀粉酶(3-1)，再加入30mL45~50'C的蒸馏水，混合均匀后，用氮气排除瓶中
6、空气，盖上瓶塞，置45'C烘箱内30min,5.1.2不含淀粉的样品准确称取log样品，置于250mL平底烧瓶中，加30mL蒸馏水。5.2测定液的制备5.2.1于上述处理过的样品溶液中加人100mL的没食子酸乙醇溶液0.3)，充分混匀后加50mL氢氧化钾溶液(3-4)，在蒸汽浴上连续回流30min后，立刻冷却到室温。5.2.2将皂化液转入一500mL分液漏斗中，用100mL水分几次冲洗平底烧瓶，洗涤液并入分液漏斗中5.2.3于上述分液漏斗中，加入100mL石油醚0.5)，盖好瓶塞，倒置分液漏斗并剧烈振摇lmin。在振摇过程
7、中，注惫释放瓶内压力。静置分层，将水相放入另一500mL分液漏斗中。重复上述萃取过程二次，合并醚液到第一个分液漏斗中。用蒸馏水洗该醚液至中性，通过无水硫酸钠过滤干燥，在40℃和氮气流下，于旋转燕发器上蒸至近干(绝不允许蒸干)后，用石油醚转移至lOmL容量瓶中，定容。5.2.4从上述容量瓶中取2mL石油醚溶液放入试管A中，再取7mL石油醚溶液放入另一试管B中，分别用氮气将试管A和B中的石油醚吹干，石油醚溶液放于A中加5mL甲醉，用来测定维生素A,E,试管B中加1mL正己烷，用来测定维生素D,5.3测定5.3.1维生素A和E的
8、测定5.3.1.1仪器条件色谱柱:25cmX4.6mm,ODS柱或具等同性能的色谱柱。流动相:甲醇。流速:1.OmL/min,灵敏度:0.005AU/MV,波长;维生素A,325nm;维生素E,290nm,5.3.1.2注射50VL维生素A,E标样(3.9.3)和501AL样品溶液(5.2-4试管A中)
