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《GBT 5413.14-1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素B12的测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、GB/T5413-14-1997自i言本标准等效采用美国公职分析化学师协会(AOAC)方法，方法准确、灵敏度高。本系列标准从实施之日起，代件GB5413-85}本标准由中国轻工总会提出。本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位:国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位:卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢(中国)投资服务有限公司。本标准主要起草人:张玉杰、王芸、殷晓红、吕为群。中华人民共和国国家标准婴幼儿配方食品和乳粉GB/T5413-14-1997维生素B12的测定代替GB5413-85MilkpomAerandformulafo
2、odsforinfantandyoungchildren一」XterminationofvitaminB12content范围本标准规定了用微生物法测定维生索B,:的方法。本标准适用」;婴幼儿配方食品和乳粉中维生索Bi:的测定。方法原理莱十曼氏乳酸杆菌(Lactobacillusleichmannii)对维生素B,:的存在具有极高灵敏性。利用这种特异性可定量测出样品中维生素1312的含量。试剂、菌种和培养基所有试剂，如未注明规格，均指分析纯;所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1生R-A水:99/L.3.2乙醉:体积分数为25%.3.3无水磷酸氢二钠。3.4无水偏垂W.硫酸
3、钠。3.5柠檬酸(含一个结品水)。3.6菌种:莱士曼氏乳酸杆菌(Lactobacillusleichmannii).3.了培养草.3.7.1乳酸杆菌琼脂培养A:光解陈15g,酵母is}膏5g,葡萄掂log，番茄汁lOOmL,磷酸二氢钾2g,聚w梨掂单油酸酷lg'琼脂log,蒸馏水10OOmL,pH6.8士0.2(25C).3.7.2乳酸杆菌肉汤培养A.:光解陈15g,酵母i}}膏5g,葡萄掂log，番茄汁IOOmL,磷酸二氢钾2g,聚di梨掂单油&AIhIg,蒸馏水l000mL,pH6-8士0.2(25C).3.7.3维生素B12测定用培养基:无维生素酸水解酪蛋白15g,葡萄糖40g，
4、天门冬酸胺0.2g，柠檬酸钠20g，抗坏血酸4g,L-肤氨酸0.4g,DL一色氨酸0.4g,硫酸腺*11,吟20mg,盐酸鸟M,吟20ing，尿lrk咙20mg,黄嚓吟20ing，核黄索1mg,盐酸硫胺素lmg，生物素I印9，烟酸2mg,p-氨基苯甲酸2mg，泛酸钙1mg,盐酸毗哆醉4mgI盐酸毗哆醛4mgI盐酸毗哆胺80印9，叶酸20体91磷酸二氢钾Ig,磷酸氢几钾Ig,硫酸镁0.4rng,氯化钠20mg,硫酸W.铁20rngI硫酸锰20mg,聚L}梨掂单油(#fi'"2g,蒸馏水10OOmL,pH6.0士0.2(25℃).3.8维生索B12:标准品。国家技术监督局1997-05-2
5、8批准1998一09一01实施GB/T5413-14-1997仪器常用实验室仪器及:分光光度计。制备5.1菌种的制备5门-I将保存在直柱状乳酸杆菌琼脂培养ilt中的莱士曼氏乳酸杆菌接种到新的培养ilt中。培养后再转接一次，然后再将土〔从固体培养基上转接到乳酸杆菌肉汤培养X.-中培养。5.1.2将乳酸杆菌肉汤中的培养液以20OOr/min离心2-3min，倾出上清液，加入10inL生理盐水(3.1)，搅匀，再离心2-3min,如此清洗3-4次，吸0.4mL该菌悬液于IOML盐水(3.1)中，待测。5.1.3用分光光度计，以生理盐水(3.1)做空白，于55omn波长下测5.1.2中菌悬液的
6、透光率，此时应在60Yo-80%之fFli.5.2标准溶液的制备5.2.1维生素B12标准V各液，浓度为100tig/mL.精确称取维生索Bu标准品，用乙Kl}(3.2)定容到维生素BJ2浓度为]OOng/mL.5.2.2维生素BI:中间V各液，浓度为Ing/mL.用乙醉(3.2)将IOML标准贮备液(5.2.1)定容至1000ML.5.2.3标准工作液，分二个浓度:高浓度—维生素B12的浓度为0.02ng/mL;低浓度—维生素B12的浓度为0.01fig/ML。从中间液中(5.2.2)吸几个5mL，用蒸馏水分别定容到250rnL和500,nL.操作步骤6.1样品的处理6.1.1无水磷
7、酸氢几钠(3.3)1.3g,无水偏重敢硫酸钠(3.4)1.飞，柠檬酸(含一个结.钻水)(3.5)].飞，用IOOML蒸馏水溶解。6.1.2称一定量的样品(约含维生索B,250-100ng)，用IOmL的上述溶液(6.1.1)A合后，再加150mL蒸馏水，f-121℃水解IOmin，冷却后调pHit'.4.5，再用蒸馏水稀释，使鼓终溶液中维生索B,:的质量浓度约在0.01-0.02ng/mL,偏T4F.硫酸钠的质量浓度小J-0.03mg/mL.6
