最新实验一 动物肝脏组织中基因组DNA提取和鉴定课件PPT.ppt

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1、实验一动物肝脏组织中基因组DNA提取和鉴定核酸的分类DNA(脱氧核糖核酸)主要存在于细胞核的染色体中。核外也有少量DNA，如线粒体DNA（mtDNA），叶绿体DNA（cpDNA），质粒DNA。RNA（核糖核酸）存在于细胞质中，如mRNA,rRNA,tRNA等。除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬菌体，其或只含DNA，或只含有RNA。2核酸的理化性质在细胞内通常与蛋白质结合，以复合物形式存在。溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。在酸性溶液中容易降解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。在强大离心力的作用下，可以从溶液中沉降下来。3学习并掌握用高盐法

2、从动物肝脏组织中的提取基因组DNA方法及其原理。一、实验目的7二、实验原理核酸在真核细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在，用DNP和RNP表示。DNA-Pro（DNP）(存在于细胞核)RNA-Pro(RNP)(存在于核仁及细胞质)溶于高盐溶液（1mol/L）,微溶于低盐溶液（0.14mol/L）溶于低盐溶液（0.14mol/L）微溶于高盐溶液（1mol/L）8三、仪器和试剂1、仪器：低速离心机、落地式高速冷冻离心机、摇床、稳压电源、电泳槽、凝胶成像系统。2、试剂：0.14mol/LNaCl－0.15mol/LEDTA(pH=8.0)；2.5mol/LNaC

3、l；25%SDS；氯仿/异戊醇=24:1（V/V）；95%乙醇；1×TAE；琼脂糖；上样缓冲液。9四、实验步骤1、DNA的提取（1）称取5g鸡肝，置于预冷的研钵中，在冰浴中剪碎，加入10mL预冷的0.14mol/LNaCl-0.14mol/LEDTA溶液，研磨成匀浆液。（2）将匀浆液加入到15mL刻度离心管中，2000r/min离心10min，弃去上清液。（3）将沉淀转移至50mL离心管中，加入10mL预冷的0.14mol/LNaCl-0.14mol/LEDTA溶液，充分摇匀后，于4℃2000r/min离心10min，弃去上清液。10四、实验步骤1、DN

4、A的提取（4）将上述沉淀转移至100mL锥形瓶中，加入10mL预冷的0.14mol/LNaCl-0.14mol/LEDTA溶液，缓慢搅拌，同时加入750uL25%SDS溶液，用封口膜封口，置于摇床中，30℃150r/min震荡30min。（5）加入7mL2.5mol/LNaCl，用封口膜封口，置于摇床中，30℃150r/min震荡10min。。（6）再加入17mL氯仿:异戊醇溶液，用封口膜封口，置于摇床中，30℃150r/min震荡20min。。11四、实验步骤1、DNA的提取（7）将混合液转移至50mL刻度离心管中，3500r/min离心10min，取

5、上清至一个新的50mL刻度离心管。（8）加入20mL95%乙醇溶液，上下颠倒混匀后，出现丝状物，用枪头挑取丝状物，或者3500r/min离心5min。（9）弃去上清液（注意：缓慢倒去上清液），沉淀物质即为DNA，空气干燥后即可加入适量的TE缓冲液。12四、实验步骤2、DNA电泳检测（1）1%琼脂糖凝胶：称取0.3g琼脂糖，加入30mL1×TAE缓冲液，在微波炉中加热，反复加热、振荡2-3次，使琼脂糖充分融化。待凝胶冷却至60℃左右，倒入插入梳子的凝胶板中（避免产生气泡），让凝胶自然凝固。（2）待凝胶凝固后，小心拔出梳子，避免前后左右摇晃，以免破坏胶面及加

6、样孔，小心将凝胶和胶床放入电泳槽中，加样孔靠近阴极的一端。（3）上样电泳：将适量DNA样品溶液和上样缓冲液混匀后，上样，100V电泳检查，根据指示剂迁移的位置，13四、实验步骤2、DNA电泳检测（3）上样电泳：将适量DNA样品溶液和上样缓冲液混匀后，上样，60V稳压电泳检查，根据指示剂迁移的位置，判断是否中止电泳。切断电源后，再取出凝胶。（4）照胶、拍照：将凝胶泡在EB溶液（注意：EB溶液为剧毒物，需带上一次性手套拿取凝胶）中10min左右，进入暗室，使用凝胶成像系统照胶并拍照。14匀浆（破碎细胞）要充分，需剪成小块。变性蛋白质层易散，吸取上清液时应仔细

7、，不要将蛋白质及下层的氯仿吸入。注意事项15电力电缆绝缘及护套厚度尺寸控制要求技术部2017.7.15主要内容1、编制依据2、一些基本概念3、标准要求及工艺控制要求4、讨论编制依据1、GB/T12706-20082、GB/T31480-2015一些基本概念1、标称厚度标准中规定的标称截面积对应的绝缘层或护套层厚度2、平均厚度在电缆绝缘层或护套层断面GB/T2951.11标准规定方法测量六个点数值取其平均值即为平均厚度（图示）。一般标准规定绝缘层平均厚度不小于标称值一些基本概念3、最薄点绝缘层或护套层断面按GB/T2951.11方法测量的最小数值即为最薄点

8、。一般规定最薄点不小于标称值90%-0.1mm电力电缆1、执行标准GB/T127