最新乳酸脱氢酶活力测定精幻灯片.ppt

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1、乳酸脱氢酶活力测定精目的要求（1）学习LDH活力测定原理；（2）测定动物肌肉组织提取液LDH活力及比活力。原理乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase，简称LDH）广泛存在于动物、植物及微生物细胞内，是糖代谢酵解途径的关键酶之一，可催化如下反应：LDH乳酸+NAD+丙酮酸+NADH+H+pH7.4-7.8（一）制备肌肉匀浆取瘦猪肉（或兔肉）一块除去脂肪及筋膜等，称取20g，按W/V=1/4比例加入4℃预冷的10mmol/LpH6.5磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液，用组织捣碎机捣碎，每次10s，连续3次。将匀浆液倒至烧杯中，置4℃冰箱提取过夜，过滤后的红色液体为组织提取

2、液，量总体积。（二）LDH活力测定实验时预先将丙酮酸溶液及NADH溶液放在25℃水浴中预热。取2只光径为1cm的石英比色皿，在一只比色皿中加入0.1mol/LpH7.5磷酸盐缓冲液3ml，置紫外分光光度计中，于340nm处调A值为0；另一只比色皿用于测定LDH活力，依次加入2.9ml丙酮酸溶液、0.1mlNADH溶液，加盖摇匀后测定A340nm，然后加入经稀释（20倍）的酶液10μl，立即计时，每隔0.5min测A340nm，连续测定3min。以A对时间作图，取最初线性部分，计算ΔA340nm/min减少值。（三）蛋白质含量测定将组织提取液稀释适当倍数（约1：20），取0.1m

3、l按Folin-酚法测定蛋白质含量。（四）数据处理每毫升组织提取液中LDH活力单位：LDH比活力总LDH活力（U）比活力（U/mg）=————————————总蛋白含量（mg）ΔA340nm/min×稀释倍数LDH活力单位（U）/ml提取液=————————————————酶液加入量（10μl）×10-3提取液中LDH总活力单位=LDH活力（U）/ml×总体积注意事项1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即用，应贮存在-20℃低温冰箱中。2、酶液的稀释度及加入量应控制A340/nm下降在0.1-0.2之间，以减少实验误差，加入酶液后应立即计时，准确记录每隔0.5minA340下降

4、值。3、NADH溶液应在临用前配制，如其纯度为75%，则应折合到100%，增加试剂的称量。加酶液前NADHA340控制在0.8左右。思考题简述用紫外分光光度计测定以NAD+为辅酶的各种脱氢酶测定原理。“论证思路”的诠释议论文的论证思路就是指作者在论述某个观点时的思维过程。这个过程讲究观点确切，讲究层次明晰，讲究论证方法运用，讲究论证材料的组合。论证思路考查综合能力，对考生的理解能力、辨析能力、概括能力等都提出有较高的要求。学习目标：学会具体分析议论文某个文段或者整篇文章的论证思路《2013年盐城市语文中考说明》中的相关考点：“能把握议论的基本结构，理清作者的论证思路”了解议论文

5、的结构与论证思路的关系，熟悉一般答题格式：结构：　引论——本论——结论论证思路：提出问题——分析问题——解决问题议论文分析“论证思路”的解题逻辑过程：1、辨识议论文的结构方式；2、给议论文划分段落层次；3、归纳段落与部分的论述要点；4、解说议论文的行文思路：如何提出问题，如何分析问题；如何得出结论，解决问题。1、抓住点示结构思路的语言标志。考生要学会抓住关键词句（语言标志）和段落准确提取和归纳答题信息。议论文的文体特征鲜明，语言表达规范，因而在表达上呈现一定的规律。如设问句表开启下文，展开深层论述；“无独有偶”表顺承；“再说”表推进；“诚然”表转入相反方面论证；“总之”表分总归

6、纳；“同样”表类比推理等。2、理解议论文的一般结构与思路。“提出问题（提出论点或论题）——分析问题（证明论点）——解决问题（得出结论或强化论点）”这是议论文的一般结构。考生需要注意的是，论点或论题是以什么方式提出来的；作者是如何围绕论点从哪几个方面进行论证的；文章的结构方式是总分式（分总，总分总），层进式，还是并列对照式等。方法点津：常见题型作者是如何证明论点的？作者的论证思路是怎样的？文章（段）的论证过程是怎样的？请简要写出全文的论证思路。明确：虽是难点，但却有章可依。如何分析议论文的论证思路呢？【课前准备】三、练笔热身：用自己的话写出《生于忧患，死于安乐》的论证思路。①舜发

7、于畎亩之中，傅说举于版筑之间，胶鬲举于鱼盐之中，管夷吾举于士，孙叔敖举于海，百里奚举于市。故天将降大任于是人也，必先苦其心志，劳其筋骨，饿其体肤，空乏其身，行拂乱其所为，所以动心忍性，曾益其所不能。‖②人恒过，然后能改；困于心,衡于虑，而后作；征于色，发于声，而后喻。‖③入则无法家拂士，出则无敌国外患者，国恒亡。‖④然后知生于忧患，而死于安乐也。参考答案首先，作者列举了历史上六位在逆境中成才的圣贤，指出一个人要肩负大任必然要经受种种磨难；接着，运用对比论证，先从正面举了三个现象论述，即使作为