织乳酸脱氢酶活力及同工酶谱的研究硕士论

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1、河北医科大学硕士学位论文高原鼢鼠不同季节不同组织乳酸脱氢酶活力及同工酶谱的研究姓名：李永秀申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：穆海玉;魏登邦20070301中文摘要第一部分高原鼢鼠血清乳酸脱氢酶活力及同工酶谱的季节性变化摘要曰的通过对低氧高二氧化碳环境巾高原鼢鼠(MvosDalaxbai／eyi)在不同季节疵清，t·乳酸(Lactate，LD)含量、乳酸脱氢酶(Lactatedehydrogenase，LDH)活力以及乳酸脱氢酶(LDH)同工酶谱的测定，探讨高原鼢鼠对低氧高．二氧化碳的适应机制。方法断颈，取凝仇，离心4000转10rnin后，取上清液，制各血清。用分光光度法测

2、定m清LD的含量、LDH活力，用连续聚内烯酰胺凝胶电泳法测定m消LDH同f‘酶谱，安装夹芯式垂直板也泳槽，制备分离胶和浓缩胶，待凝胶聚合后，取血清10uL，DrJX20uL40％蔗糖和50uLO．1％澳盼兰，混匀后，用微量注射器吸取6uL，加入凹形样品楷坦。加样后，打开电源，将电流调至10MA／板，待样品进入分离胶后，改为20～25MA／板，等清晰的兰紫色酶带f=

3、{现距胶底1cm处停止电泳。立即染色，脱色，将凝胶极放入保存液r

4、f浸泡2—3小时。然后对4

5、明显的季挣性变化的趋势。LD含量、LDH活力在随着春季、夏季、秋季不同季节的变化而显著减小(P<0．05)，血清中LD含量在舂季、夏季和秋季分别为6．98+1．20mmol／L，6．65il．80mmol／L，3．17+0．38mmol／L；LDH活力在春季、夏季和秋季分别为586579士I338．94U／mg，4493．73士1153．47U／mg，3338．11：±=523．74U／rag。高原鼢鼠m清中LDH同r：酶者在不同的季j，有不同的酶带，在春季LDH同：【酶龠订明显的5条区带，即LDH。、LDH。LDH，、LDH4、LDH5，均着色深且带型比较宽，夏季除LDH，、L

6、DH4、LDt。f5的区。带着色变淡变窄外，LDHl、LDH!酶带几于消火。秋李变化更}刃{砂，除LDH5区带I夕l，其他的晒带几乎消失。结论血清中LD含量、LDH活力以及m清中LDHf刊i』一酶憎随季节的变化而呈现明显变化的趋势。关键词：高原鼢鼠；乳酸脱氢酶活力：低氧；高二氧化碳；乳酸脱氢酶同工酶；乳酸中文摘要第二部分高原鼢鼠不同组织乳酸脱氢酶活力及同工酶谱的季节变化摘要目的通过对低氧高二氧化碳环境一I·高原鼢鼠(Myospalaxbaileyi)不同组织乳酸脱氯酶(}．actateDehydrogenase，LDH)活力及同：I：酶谱在不同季1，的变化，探讨高原鼢鼠特殊生存环

7、境的特异生理机能和代刻机制。方法动物经5％戊巴比妥钠腹腔麻醉后，取侮只高原鼢鼠心、肝、肺、肾、脑和骨骼肌6种绍织，放入4℃预冷的0．9％NaCL(郎生理盐水)中洗去血污，再称取各组织约0．59，按w／v=1／4比例加入4℃预冷的O．9％NaCI。2ml，Jf-J硼t+体冰浴匀浆，匀浆液簧入试管中，经10000r／min离心20min，取I：清液用于酶活力测定和LDH同：L酶的F巳泳分析。LDII酶活力测定：』钉0．1mol／LPH7．5磷酸盐缓冲液在紫外可见分光光度计中340nto处调零，然后依次加入丙酮酸钠溶液2．9ml，NADH0．1ml，摇匀后，每隔0．5min测340HM

8、处的吸光值(A340。。)连续测定3min，1-t4算A340nf"，。。减少值，可得细织提取液巾LDH活力(U／mL)。数据川SPSSVersionll．0统计软件处理。LDH同丁：酶的电泳分析：采用聚丙烯酰胺凝胶：乖巍、I‘板中文摘要电泳分离法，浓缩胶浓度2．5％，分离胶浓度7．0％，电极缓冲液Tris．一”氨酸缓冲液，6川点样。开始Ib泳时叱流为lOmA，待样-W，进入分离胶时，将电流调至25mA，约进行4小时芹右。电泳结束后，取LDH胶片‘放入配好的染色液rh避光37。C20分钟。然后J=}j水漂沈数次，放入保存液中保存。然后对不同季常m清LDH同丁睛曾进行比较一陀分析。

9、结果高原鼢鼠心、腑和’目’竹各肌LDI-t活力随符春季、夏季和秋季的变化显著iJ戎4,fP<005)。骨舒各JJ』l符季纠LDIq活力手i丁心肌符季纵L』)H活力。在不同季节中，高原"删Eli)鼠不同绷彭{中LDH的l刊I．酶谱，黔足小刚的，存在着纠z扒ri／，-j异4阡。高掀鼢鼠心和肾以LDH。为0：。在夏季，高J糸鼢鼠’肾船肌以I。DH，，LDH．为主。在春季、夏季剐秋季Ih『岛肠!鼢5I；(LDHl州l酶在不同纰织中表现}I』分布特异性，并通过改变LDH活力和LDH同工酶，