最新乳酸脱氢酶活力测定教学讲义PPT.ppt

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1、乳酸脱氢酶活力测定原理乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase，简称LDH）广泛存在于动物、植物及微生物细胞内，是糖代谢酵解途径的关键酶之一，可催化如下反应：LDH乳酸+NAD+丙酮酸+NADH+H+pH7.4-7.8LDH可溶于水或稀盐溶液，可制备组织匀浆，经浸泡、离心，得上清为组织提取液。LDH测定方法很多，紫外分光光度法最为简便快速。鉴于NADH和NAD+在340nm和260nm处有各自最大吸收峰值，因此以NAD+为辅酶的各种脱氢酶类都可通过340nm光吸收值的改变，定量测定酶的含量。本实验反应液中含丙酮酸及NADH，在一定条件下加入一定量酶液，观察NADH在反

2、应过程中340nm处光吸收减少值，减少越多，则LDH活力越高。其活力单位定义为：在25℃，pH7.5条件下A340nm/min下降为1.0的酶量为1个单位。可定量测定每克湿重组织中LDH单位，定量测定蛋白质含量即可计算比活力（U/mg）。（二）LDH活力测定实验时预先将丙酮酸溶液及NADH溶液放在25℃水浴中预热。取2只光径为1cm的石英比色皿，在一只比色皿中加入0.1mol/LpH7.5磷酸盐缓冲液3ml，置紫外分光光度计中，于340nm处调A值为0；另一只比色皿用于测定LDH活力，依次加入2.9ml丙酮酸溶液、0.1mlNADH溶液，加盖摇匀后测定A340nm，然后加入经稀释

3、（20倍）的酶液10μl，立即计时，每隔0.5min测A340nm，连续测定3min。以A对时间作图，取最初线性部分，计算ΔA340nm/min减少值。（三）蛋白质含量测定将组织提取液稀释适当倍数（约1：20），取0.1ml按Folin-酚法测定蛋白质含量。（四）数据处理每毫升组织提取液中LDH活力单位：LDH比活力总LDH活力（U）比活力（U/mg）=————————————总蛋白含量（mg）ΔA340nm/min×稀释倍数LDH活力单位（U）/ml提取液=————————————————酶液加入量（10μl）×10-3提取液中LDH总活力单位=LDH活力（U）/ml×总体积注

4、意事项1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即用，应贮存在-20℃低温冰箱中。2、酶液的稀释度及加入量应控制A340/nm下降在0.1-0.2之间，以减少实验误差，加入酶液后应立即计时，准确记录每隔0.5minA340下降值。3、NADH溶液应在临用前配制，如其纯度为75%，则应折合到100%，增加试剂的称量。加酶液前NADHA340控制在0.8左右。思考题简述用紫外分光光度计测定以NAD+为辅酶的各种脱氢酶测定原理。实验：WEB服务器的配置Web服务器是网络系统平台的重要主件。它除了提供用于Web的硬件服务器外，还需要web服务器的软件，目前用于建立web服务器的软件主要有基于微

5、软平台IIS和APACHE等。下面将介绍WINDOWS下IIS服务器的配置。WEB服务器的配置1．WINDOWS下Web服务器配置IIS（InternetInformationServer）是微软出品的架设WEB、FTP、SMTP服务器的一套整合软件，捆绑在Windows2000/NT中，其方便性和易用性，使它成为最受欢迎的Web服务器软件之一。WINDOWS可以采用第三方软件或系统自带IIS6.0两种方式架设WEB服务器；同时WINDOWS还有一个web版本，专用于基于web服务的各种web接口应用，功能极其完美。我们以WINDOWS系统自带的IIS6.0为例，介绍IIS6.0

6、配置web服务器的过程。1)IIS安装过程在控制面板里依次选择[添加或删除程序]的[添加/删除Windows组件]；双击[应用程序服务器]，再点击[Internet信息服务（IIS）]，点确定即安装完成。如图9.47所示：WEB服务器的配置图9.47IIS安装界面2）IIS（InternetInformationServer）的基本配置IIS安装完成后，同其它Windows平台一样，此时默认Web站点已经启动了。需要注意的是，IIS6.0最初安装完成后只支持静态内容的，并不能正常显示基于ASP的网页内容，因此首先要做的就是打开其动态内容支持功能。依次选择[开始]－[程序]－[管理

7、工具]－[internet信息服务管理器]，在打开的IIS管理窗口左面点[web服务扩展]；如图9.48所示，启用[ASP.NETv.1.1.4322]以及[ActiveServerPages]。图9.48开启ASP服务右击已存在的[默认WEB站点]，选择属性，开始配置IIS的WEB站点。每个Web站点都具有唯一的、由三个部分组成的标识，用来接收和响应请求的分别是端口号、IP地址和主机头名。浏览器访问IIS的时候是这样的：IP—端口—主机头—该站点主目录—该站点的默认首文档。所以