乳酸脱氢酶测定试剂盒(乳酸底物法)标准化操作规程.docx

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1、乳酸脱氢酶测定试剂盒（乳酸底物法）标准化操作规程1目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。2授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。3适用范围本试剂适用于体外定量检测人血清或血浆中乳酸脱氢酶的活力。4检验方法本试剂盒采用底物法测定乳酸脱氢酶的活力。5检验原理样品中的乳酸脱氢酶（LDH）催化L-乳酸氧化成丙酮酸，同时NAD+被还原为NADH，引起340nm处的光吸收值升高，通过监测340nm处光吸收值上升的速率，可以测定乳酸脱氢酶的活力。6标本要求6.1样本为血清或血浆。6.2采血后应及时离心分离，不得使

2、用溶血或被污染的样本。血浆样本采用肝素抗凝。6.3样本在2℃～8℃可稳定7天。请勿冰冻保存（0℃以下）样本，以免破坏肝同工酶。7试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司乳酸脱氢酶试剂盒（底物法）7.2试剂组成试剂盒主要组成成份浓度试剂1(R1)Tris缓冲液100.0mmol/L乳酸锂62.5mmol/L氯化钾190.0mmol/L试剂2(R2)Tris缓冲液100.0mmol/L氧化型辅酶Ⅰ30.0mmol/L含非反应性填充物及稳定剂/7.3试剂的稳定性与贮存：7.3.14份试剂1与1份试剂2混合后，可作为单

3、试剂使用。混合后的试剂溶液避光储存于2℃～8℃可稳定5天。7.3.2试剂在2℃~8℃条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为18个月。7.3.3试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天。7.4试剂的变质指示：若试剂混浊，或以水为空白在340nm处吸光度值大于0.500A时，则不能使用。8实验仪器及性能指标8.1实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1空白吸光度：A≤0.50。8.2.2空白吸光度变化率：︱△A︱/min≤0.002。8.2.3分析灵敏度：测试1U/L被测物时，吸光度变化率（△A/min）

4、＞0.00004。8.2.4线性范围：25U/L～800U/L；线性相关系数≥0.9900；[25,100]U/L区间内，线性绝对偏差应不超过±10U/L；（100,800]U/Lqjn,相对偏差不超过±10％。8.2.5准确度：相对偏差应在±10%范围内。8.2.6重复性：CV≤5.0%。8.2.7批间差：R≤6.0%。9校准程序9.1校准品来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司生产的临床化学校准血清9.2校准品的组成：人血清9.3校准品使用9.3.1小心打开瓶盖，避免内容物的任何损失；9.3.2在20-25℃的室温下，准确量取

5、5ml蒸馏水复溶1瓶校准血清；9.3.3拧紧瓶盖，避光放置30分钟，使之完全溶解；9.3.4轻轻混匀，确保溶液均一性。勿摇晃小瓶，避免泡沫产生；9.3.5使用时，移取所需的体积后，把校准血清盖紧瓶盖放回冰箱中保存；9.3.6复溶后的校准血清可用于手工测试，也可用于全自动生化分析仪9.4校准品使用注意事项9.4.1若该复溶血清受细菌污染，将会降低许多成分的稳定性。9.4.2不同批号的校准血清不能交叉使用，因为批号于批号之间的赋值不同。9.4.3请勿用嘴直接吸取试剂，避免接触皮肤、眼睛及粘膜，一旦接触，应立即用大量水冲洗。9.5

6、校准程序建议使用试剂盒配套的校准品，以纯化水和校准品进行2点校准测定。测定后仪器自动拟合成校准曲线。当试剂批号更换或质控失控时，需要重新校准。10质量控制10.1质控品来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司生产的临床化学质控血清(水平I和水平II)10.2质控品组成：人血清10.3质控品存贮未复溶的校准血清在避光条件下，2～8℃可稳定至标签失效期。复溶后校准血清在避光条件下，2～8℃可稳定7天；15～25℃可稳定1天；-20℃可稳定30天。10.4质控品使用注意事项10.4.1若该复溶血清受细菌污染，将会降低许多成分的稳定性。10

7、.4.2请勿用嘴直接吸取试剂，避免接触皮肤、眼睛及粘膜，一旦接触，应立即用大量水冲洗。10.4.3因批与批之间的质控血清赋值不同，所以不同批号的质控血清不能当做校准血清使用。10.5质量控制：建议使用迪瑞公司的质控品，进行质量控制。实验室应自行建立质控区间和限值。若质控值失控，每个实验室应采取纠正措施。11操作程序11.1试剂配制试剂1和试剂2均为液体试剂，可直接使用。11.2项目参数：测定温度37℃R1用量240μL主波长340nmR2用量60μL副波长405nm样本用量5μL比色杯光径1.0cm延迟时间30s吸光度范围0

8、A~2A反应时间60s测定模式速率法反应方向正反应样本用量:5μL试剂R1用量:240μL加试剂R2:60μL记录吸光度变化△A/min温度:37℃主波长:340nm30s60s300s11.3样本测试步骤：11.4注意事项11.4.1本品仅用于体外诊断。11.4.2避免测试中途添加试剂。