不同mem培养基培养2bs细胞生长情况比较

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1、不同MEM培养基培养2BS细胞生长情况比较　　【摘要】目的比较海克隆、日水MEM培养基培养2BS细胞生长过程的细胞贴壁、细胞形态、分裂速度、单层数量等生长情况。方法分别按标准配制日水、海克隆两种MEM培养基，2BS细胞从复苏开始分别用两种培养基进行传代培养。比较细胞生长状况及形态。结果海克隆公司MEM和日水MEM在细胞生长各个方面均无差异，符合人胚肺二倍体细胞的生长需要。结论美国海克隆实验公司的MEM培养基完全支持2BS细胞的生长要求。【关键词】MEM；人胚肺二倍体细胞随着疫苗质量要求越来越高，国家食品药品监督管理局在2009年第6号公告“关于进一步规范生物制品

2、质量控制要求的通告”中已明文规定生物制品生产中应尽可能避免使用抗生素。现许多企业生产疫苗都使用MEM培养基[1-3]。由于日水公司MEM中含有卡那霉素，因此无抗生素培养基将被广泛应用。我们将海克隆公司MEM和日水MEM在细胞生长各个方面做了比较，获得较满意的结果。1主要材料与设备1.1海克隆MEM培养基（不含卡那霉素）批号：AWK22509DC41.2日水MEM培养基批号：6166091.3太原润生新生牛血清批号：1007261001.4胰酶（美国BectonDickinsonandCompany）1.5细胞计数仪（countstar）1.6冰点渗透压仪（Adv

3、ancedInstruments）1.7显微成像系统（重庆光电）2方法2.1海克隆培养基配制，取海克隆MEM按9.5g/L加入到灭菌注射用水中，搅拌均匀，除菌过滤、分装，37℃保存。2.2日水培养基配制，取日水MEM按9.4g/L加入到灭菌注射用水中，搅拌均匀，除菌过滤、分装，37℃保存。2.3细胞生长液配制，为含10%新生牛血清的MEM液，pH值7.2～7.4，渗透压250～300mOsmol/kg。2.4细胞复苏取出27代细胞2管，速融，分别用吸管吸至T75细胞培养瓶中，补加生长液至30ml。37℃、CO2孵箱静置培养，第二天换液，继续培养。2.5细胞生长情

4、况实验①2BS细胞传代培养24h、48h、72h后，镜下观察细胞生长情况及形态。②细胞计数：细胞单层后，用胰酶消化细胞，取204μl细胞悬液到20μl台盼蓝中，混合均匀计数[4]。3结果3.1两种MEM培养液的细胞贴壁、细胞形态、单层状态2BS细胞株在两种MEM生长液中，培养过程中显微成像系统观察比较细胞生长形态、贴壁、伸展、牵手、成网、单层等各生长阶段相似，均无显著差异。72h单层消化计数，两种MEM培养的T75瓶细胞数量均能达到1200万个。海克隆MEM72h日水MEM72h3.2两种MEM液细胞活性比较相同条件下用海克隆、日水两种MEM连续传5代细胞，总结

5、两种MEM对细胞活性的影响。每次单层传代时分别取细胞悬液，计数并记录活细胞数，记录平均活细胞率，海克隆活细胞率为96.4%、96.3%、97.4%、97.1%、97.3%；日水为96.3%、96.5%、97.2%、97.2%、97.4%。两种MEM均能使细胞保持较高的活力，经统计学分析P>0.05，两组差异无统计学意义。4讨论人胚肺2BS细胞在复苏、传代、生长过程中对培养基要求比较高，其pH及渗透压直接影响到细胞的贴壁、分裂及生长。经过长期的实验分析，2BS细胞在复苏阶段pH值要比传代阶段略低一些。这样复苏的细胞在贴壁、形态、分裂速度等方面都较为理想。在细胞连续

6、传代早期，一般以1：2传代比例为宜，待细胞传过两代后，4方可转至1：4传代比例。胰酶消化细胞间隙的同时，对细胞膜也有伤害作用，消化时要注意控制好胰酶的活性，防止细胞消化时细胞膜被破坏，直接影响细胞传代生长。本实验在使用海克隆、日水两种MEM对2BS细胞的传代培养过程中，2BS细胞在贴壁、形态、分裂速度、单层数量等生长情况均无明显差异，均能保证2BS细胞正常生长。参考文献[1]药典委员会.中华人民共和国药典.第三部，2010.[2]刘烨，李生军，李春明.冻干水痘减毒活疫苗转瓶生产工艺的建立.微生物学免疫学进展，2004，32（1）：9.[3]李建平，周长军，王宇，

7、等.国产与进口DMEM培养基培养CHO-C28细胞效果比较.中国生物制品学杂志，2007，20（3）：219.[4]郝鹏博，杜岩，谢秋红，等.比较胰酶/EDTA两种消化液对携带水痘-带状疱疹病毒的2BS消化效果分析.中国实用医药，2011，06（21）：60-61.4