临床病理基本知识及病理技术2010

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诊断病理学基本知识 病理学的研究对象（一）人体病理学研究对象尸体解剖（Autopsy）活体组织检查（Biopsy）细胞学检查（Cytology）（二）实验病理学研究对象动物实验（AnimalExperiment）组织和细胞培养（TissueandCellCulture） 诊断病理学的概念临床实际工作中，许多病例的疾病诊断有赖于对病变器官或组织的病理检查，这种检查称为活体组织检查(biopsy)。病理学关于这方面的实践和理论范畴称诊断病理学或外科病理学。 一、病理诊断的重要性与局限性 （一）重要性1．建立在全面系统病理检查基础上的病理诊断是疾病诊断的“金标准”；2．有计划的定期活检有助于了解疾病的动态变化和疗效判断；3．系统、完整的病理资料有助于认识新的疾病或疾病类型。 （二）局限性1．形态学的局限性只能对有形态学改变的疾病，尤其是对有特征改变的疾病作出诊断。对无明显形态学改变的功能性或代谢性疾病，病理学检查不能确诊； 同病异形和同形异病：同一疾病在不同病例常呈不同形态。不同疾病常呈相同或极相似形态。疾病形态的复杂多变导致病理诊断的复杂性。鉴别诊断有赖于临床资料和病理鉴别诊断技术。2．小块活检组织的“代表性”有限。3．病理医生的主观性病理诊断受病理医师的经验和思维方式影响，带主观性和经验性。 二、病理标本的采集和送检 （一）活检小标本1．淋巴结活检 当一组淋巴结肿大时，各个淋巴结的病变常常是不同步的。若多组淋巴结肿大，勿取腹股沟淋巴结；若一组多个淋巴结肿大，勿取最小淋巴结；尽可能将淋巴结完整取出；若疑为淋巴瘤，勿要求冰冻报告。 2．勿用电灼作病理取材3．取材时注意：善于识别病灶；勿仅取坏死组织；勿过度挤压组织，活检钳必须锐利；若剖腹作病理活检，待得到阳性病理报告后关腹；刮宫标本必须全部送检。 （二）肿物或器官切除标本送检无论术前有无病理诊断，手术标本都应送检。术前活检的病理诊断往往有局限性甚至有误，最后诊断应根据肿物或器官的全面检查作出。 肿物或器官切开的方法：肿块沿最长径线切第一刀，以后切面与第一刀平行。乳腺沿肿块中央与乳头连线切第一刀。肺叶沿肺门作冠状切开。食管沿病灶对侧纵行切开。 胃沿胃大、小弯剪开肠沿病灶对侧纵行剪开子宫沿宫颈向宫底作冠状切开肾沿肾门作冠状切开重点检查部位或细微病灶要作标记，并在送检单上说明。 (三）术中冰冻切片 送标本作冰冻切片检查的原则：只有当临床须根据冰冻切片病理报告决定手术方式或范围时才送标本作术中冰冻检查；剖腹活检免疫荧光检查等标本须作冰冻切片，但不必作术中冰冻检查； （四）体液(胸腹水、尿、脑脊液、痰)的送检：新鲜（2小时内）送检或冰箱储存；勿加固定液；沉淀物必须送检；指导病人取痰。 (五)送检单填写重点内容：术中所见或病灶描写；冰冻送检单须说明送检物是何种组织；刮宫标本须说明末次月经日期；疑血液病标本须说明外周血像和骨髓涂片结果临床诊断可能诊断1，2，3；尽可能不要写“肿块性质待查”，“发热原因待查”旧病理号，以前病理诊断；住院号；姓名；年龄； 三、标本的固定（一）固定的意义使各种酶灭活，防止组织自溶。保存细胞亚结构，促进各种化学成分在原位凝固沉淀。（二）固定的时机越快越好，最迟不超过离体后2小时（三）固定液种类和选择 1．10%福尔马林1份体积市售福尔马林加9份体积缓冲液（PH7.4）一适用于手术及活检标本固定；2．95%酒精适用于细胞涂片，刷片固定3．4%戌二醛适用于电镜标本固定4．特殊固定液，如糖原固定液，等 （四）固定液的量大于标本的4倍体积，或固定液水平面高于标本（五）哪些标本不必固定？术中冰冻检查标本；肾穿刺标本；免疫荧光、某些免疫组化检查标本；肌病标本 四、病理标本的长期保存根据不同目的用不同方法液体保存石蜡包埋塑料包埋液氮保存低温冰箱（低于-20℃保存） 五、病理检查的基本过程第一天肉眼检查、取材，固定、脱水、浸蜡。第二天石蜡包埋，切片，染色，初验第三天复验，发出病理报告第四、五天复杂疑难病例需补取材，特殊检查、会诊中华医学会：临床技术操作规范(2004年)规定病理报告于5个工作日内发出 六、病理报告的形式（一）肯定诊断的报告（二）未完全肯定诊断的报告，需结合临床其他资料综合判断1.倾向性诊断2.可能性诊断（三）描述性报告（四）否定性报告 七、病理报告阴性或差错的原因1）取材失当2）制片质量差3）病理医生经验不足或阅片匆忙草率4）疾病形态的复杂性和病理检查的局限性若病理报告与临床不符，临床与病理医生必须沟通，讨论。正确评价病理科的功过。 病理学技术 1.组织化学2.免疫组织化学3.电子显微镜4.基因芯片、组织芯片5.激光显微切割6.原位分子杂交、原位荧光杂交7.比较基因组杂交 一、免疫组织化学的概念免疫组织化学是在免疫学和组织化学的基础上发展起来病理学技术。用特异性的单克隆或多克隆抗体检测组织切片中是否存在相应抗原。 特异性抗体在适当条件下与组织切片中的抗原结合后，通过标记在抗体分子上的酶将显色剂氧化，显色物质沉淀在抗原抗体结合的部位从而显示抗原所在的位置（细胞膜、细胞核、胞浆）和抗原的多寡或强弱。 二、免疫组化的基本原理组织抗原第一抗体（鼠抗人）第二抗体（羊抗鼠）过氧化物酶氧化底物生成棕色产物玻片卵白素－生物素－过氧化物酶法 可用免疫组织化学方法检测的抗原包括人体和病原微生物的各种抗原成分。免疫组织化学技术可作为核酸原位杂交的技术基础。 三、免疫组化技术在诊断病理学中的应用1.肿瘤分类的鉴别诊断而不是肿瘤与非肿瘤或良恶性肿瘤的鉴别诊断2.肿瘤相关标志的检测3.某些病原微生物的检测，如HPV、CMV、EBV、HBV等 标记物类别抗体名称阳性标记的常见肿瘤铬粒素A(Cg.A)突触素(Syn)s-100蛋白神经元特异性烯醇化酶NSE胶质纤维酸性蛋白GFAP神经内分泌标记胶质瘤神经内分泌肿瘤波形蛋白（Vimentin）间叶组织标记肌动蛋白(actin)HHF35结蛋白(desmin)肌源性肿瘤间叶组织肿瘤间皮间皮瘤CEA腺癌上皮性肿瘤细胞角蛋白（CK）上皮组织标记常用免疫组化标志 HBV感染HBsAgHBcAgCMV感染CMVHPV感染HPV-Ag某些微生物标记胃肠间质瘤CD117（C-kit）抑癌基因突变或过表达P53，P21肿瘤增殖活性Ki-67,PCNA生殖细胞肿瘤胎盘硷性磷酸酶(PLAP)前列腺癌PSA，P504S肝癌，内胚窦瘤AFP乳腺癌，宫内膜病变PR，ER，CerbB2某些肿瘤相关标记淋巴瘤B淋巴瘤T淋巴瘤霍奇金淋巴瘤NK/T淋巴瘤白细胞共同抗原（LCA）CD20CD79αCD3CD45RO（UCHL1）CD30CD15CD56淋巴造血组织标记 四、免疫组化检测成功的关键因素1、标本固定标本的及时、充分固定是免疫组化检测成功的前提固定液：10%福尔马林固定时间：24-48小时为佳2、抗体效价3、实验操作技术临床医生要了解、关心、支持病理科工作，使病理科更好为临床服务。