眼络通冲剂研究论文.doc

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1、眼络通冲剂研究论文1仪器与试药1.1仪器日本岛津LC10ATvp高效液相色谱仪、SPD10Av紫外检测器；7725i手动进样阀（20μl定量管），10μl微量注射器；HS色谱数据工作站V4.0+（杭州英谱）；CQ250超声波清洗器。1.2试剂与药材葛根、川芎、三棱等药材，βCD（上海伯奥生物科技有限公司），葛根素对照品（供含量测定用）、川芎对照药材均由中国药品生物制品检定所提供，批号分别为752200801和091820007；薄层层析硅胶G（浙江雁荡山试剂厂），甲醇（色谱纯），正己烷、乙酸

2、乙酯、乙醚及石油醚均为分析纯，水为蒸馏水。2方法与结果2.1眼络通冲剂的制备将处方量饮片打成粗粒，混合均匀，加10倍水量，按审批标准制剂工艺水煎煮法提取2次，第1次1.5h，第2次1h，提取液合并，静置，取上清液，浓缩至比重1.25以上的浸膏。加入人工麝香、少量糊精及矫味剂，混合均匀，用70%乙醇适量制软材，过10目筛制粒，50℃低温烘干，分装，规格为15g/袋。如上制作三批，批号分别为：080310、080320、080401。2.2川芎定性鉴别2.2.1供试品溶液的制备取本品细粉4g，加无水乙醇5m

3、l，摇匀，再加入乙醚30ml，加热回流1h，放冷，滤过，取滤液挥干，加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺川芎的阴性对照样品4g，同法制成阴性对照溶液。2.2.2对照药材溶液的制备取川芎对照药材1g，加乙醚30ml，加热回流1h，同法制成对照药材溶液。2.2.3薄层层析板的涂铺取硅胶G3.5g，置研钵中，加水12ml，研磨均匀，铺板10×20cm2薄板一块，晾干，于110℃烘箱中活化30min，置干燥器中备用。5学海无涯2.2.4薄层色谱法照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录）试验，吸取上

4、述3种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（9：1）为展开剂，展开12cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，结果供试品色谱图中，在与对照药材色谱相对应的位置上，显相同颜色的亮蓝色荧光斑点，Rf=0.40，阴性样品无此斑点。2.3三棱定性鉴别2.3.1供试品溶液的制备取本品细粉4g，加无水乙醇5ml，摇匀，再加入乙醚30ml，50℃水浴加热回流1ｈ，放冷，滤过，取滤液置40℃水浴上浓缩至约2ml，作为供试品溶液。另取缺三棱的阴性对照样品4g，同法制成阴性对照溶液。2.3

5、.2对照药材溶液的制备取三棱对照药材2g，加乙醚30ml，加热回流1h，同法制成对照药材溶液。2.3.3薄层层析板的涂铺取硅胶G3.5g，置研钵中，加0.6%羧甲基纤维素钠溶液12ml，研磨均匀，铺板10×20cm2薄板一块，晾干，于110℃烘箱中活化30min，置干燥器中备用。2.3.4薄层色谱法照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录）试验，吸取对照药材溶液5μl，供试品溶液与阴性对照溶液各10μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯（17∶3）为展开剂，展开

6、12cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，结果供试品色谱图中，在与对照药材色谱相对应的位置上，显相同颜色的亮蓝色荧光斑点，Rf=0.45，阴性对照样品无此斑点。2.4葛根素含量测定2.4.1色谱条件与系统适用性试验以Kromasil100-5C18（4.6mm×250mm，5μm）为色谱柱；甲醇-水（30：70）为流动相；流速1ml/min；检测波长为250nm；进样量为5μl，柱温为室温。在此条件下，样品色谱图中葛根素与其他相关峰均能达到基线分离，保留时间为16.4min，葛根素峰理论板数

7、应不低于3000，与相邻杂质峰的分离度应大于1.5。阴性样品色谱图表明，处方中其他几味中药对测定无干扰。2.4.2对照品纯度检查取每1ml含葛根素1.29mg的70%甲醇溶液，进样10μl，在本实验条件下，未见杂质峰，按面积归一法计算纯度为100%。2.4.3线性关系精密称取经60℃5学海无涯减压干燥至恒重的葛根素对照品12.98mg，置10ml量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分置10ml量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，按本

8、文给定的色谱条件，各进样5μl，测定峰面积，以峰面积积分值Y与对照品进样量X（μg）进行线性回归，回归方程为Y=4.526×106X+5.464×104r=0.9999结果表明：葛根素进样量在0.06～0.65μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。因此，在线性范围内可采用外标一点法定量。2.4.4精密度和重复性试验取同一对照品溶液，重复进样5次，求得葛根素峰面积的RSD为0.77%。另称取同一批号（080310）样品5份，每份约0.5g，分