鸡油菌3-O-Me-Galactan活化巨噬细胞的作用研究.docx

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1、鸡油菌3-O-Me-Galactan活化巨噬细胞的作用研究鸡油菌是一种常用的食用菌,不仅营养丰富,而且具有食疗作用。多糖作为鸡油菌中的主要成分,具有抗氧化、抗肿瘤、促进脾细胞增殖以及免疫调节等功能。目前对鸡油菌多糖的活性研究较多,但对其活性的机制研究较少。本论文主要研究鸡油菌多糖活化巨噬细胞的作用机制,进而探讨其分子量与活化巨噬细胞的关系,以及通过调节巨噬细胞免疫抑制结肠癌细胞生长的作用机制,具体内容如下:利用水提醇沉法制备得到水溶性鸡油菌多糖WCCP。活性研究表明,WCCP能够活化巨噬细胞释放NO、TNF-α及IL-6。为了研究鸡油菌多糖中具有活化巨噬细胞作用的活性

2、成分,进一步利用离子交换层析和凝胶层析对WCCP进行分级,得到中性糖均一级分WCCP-N-b和酸性糖均一级分WCCP-A-b,分子量分别为18kDa和10kDa。WCCP-N-主b要由Gal和Me-Gal组成,WCCP-A-b主要由Glc,Man和GlcA组成。实验室前期结构研究表明,WCCP-N-b的结构为线性的3-O-Me-Galactan,而WCCP-A-b是由β-1,6-D-Glcp构成主链,β-1,3-DGlcp、β-1,4-D-Manp及t-β-GlcpA构成侧链。对WCCP-N-b和WCCP-A-b活化巨噬细胞的作用进行分析,结果显示两个级分均能活化巨噬

3、细胞,但WCCP-N-b的作用效果较好。因此,本论文选择对WCCP-N-b级分进行深入研究。WCCP-N-b能够促进巨噬细胞吞噬以及分泌NO和细胞因子的能力,从而活化巨噬细胞。通过WB、ELISA、免疫荧光和siRNAknockdown等方法对WCCPN-活b化巨噬细胞的机制进行研究。结果表明,WCCP-N-b通过巨噬细胞表面的TLR2受体,激活巨噬细胞内MAPK和NF-κB信号通路,使NF-κB入核,从而活化巨噬细胞,促进NO、TNF-α和IL-6的表达。WCCP-N-不b仅能够活化RAW264.7小鼠巨噬细胞系,还能够活化从Balb/c小鼠腹腔内分离的原代腹腔巨噬

4、细胞和从Balb/c小鼠骨髓内分离出的原代骨髓单核巨噬细胞以及THP-1单核巨噬细胞,这说明WCCP-N-b能够活多种化巨噬细胞。为了进一步研究WCCP-N-b的分子量与调节巨噬细胞活性的关系,本论文采用部分酸水解的方法处理WCCP-N-b,制备得到四个分子量依次降低的级分,分别为WCCP-N-b1~4(16.1kDa、11.2kDa、5kDa、3.5kDa)。单糖组成结果显示,WCCP-N-b1~4的单糖组成基本不变,均与原始级分WCCP-N-b相同,说明部分酸水解仅改变了分子量大小,并未改变多糖的组成。对这几个级分活化巨噬细胞的能力进行分析发现,随着分子量降低,其

5、促进巨噬细胞分泌NO、TNF-α和IL-6的能力以及活化巨噬细胞内MAPK和NF-κB信号通路的能力逐渐减弱。当分子量达到3.5kDa时,不再具有活化巨噬细胞的作用。上述结果说明,分子量是3-O-Me-Galactan活化巨噬细胞的一个关键因素。为研究WCCP-N-b活化巨噬细胞与抑制结肠癌细胞生长的关系,通过MTT、流式细胞仪检测以及WB等方法对WCCP-N-b抑制结肠癌细胞生长的作用进行分析。结果表明,WCCP-N-b活化RAW264.7细胞的上清能够抑制HCT116和HT29细胞增殖,促进HCT116和HT29细胞caspase依赖途径的凋亡。WCCPN-活b化

6、的小鼠骨髓和腹腔巨噬细胞上清能够抑制HCT116细胞增殖,当MAPK、NF-κB和TLR2受体被抑制后,其抑制HCT116细胞增殖的作用减弱。这一结果说明,WCCP-N-b可通过活化巨噬细胞,释放免疫活性物质来间接抑制结肠癌细胞生长。综上所述,本论文从鸡油菌多糖中获得线性3-O-Me-Galactan(WCCP-N-b),其通过巨噬细胞表面的TLR2受体,激活巨噬细胞内MAPK和NF-κB信号通路,活化巨噬细胞,分子量是影响其活性的关键。同时,该多糖可通过活化巨噬细胞间接抑制结肠癌细胞生长。这些研究结果丰富了多糖免疫调节及抗肿瘤研究的数据,为多糖的免疫调节活性与分子量

7、的关系研究提供方法参考及理论依据,也为鸡油菌多糖作为功能性食品的开发提供理论支持。