香菇多糖对小鼠巨噬细胞的活化作用.doc

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1、香菇多糖对小鼠巨噬细胞的活化作用【摘要】目的探讨香菇多糖（LNT）对机体的免疫系统刺激活性。方法（1）615纯系小鼠静脉注射LNT，测定巨噬细胞吞噬功能；（2）肿瘤坏死因子（TNF）的测定；取传代后3～4天L615小鼠白血病细胞检测细胞毒；（3）荧光染色和DNA电泳观察细胞凋亡。结果LNT能够诱导体外培养的巨噬细胞、脾细胞和胸腺细胞的培养上清液中TNF含量显著增加。诱导后的巨噬细胞上清对L615白血病细胞细胞毒活性由对照的11．4%增高到66．2％。且呈LNT剂量依赖性，作用后的白血病小鼠细胞体积

2、显著缩小，核发生固缩，呈现凋亡细胞特征。结论LNT活化后的巨噬细胞对肿瘤细胞有显著的细胞毒作用，其机制与诱导巨噬细胞产生TNF而介导肿瘤细胞凋亡有着密切的关系【关键词】香菇多糖巨噬细胞肿瘤坏死因子细胞凋亡【Abstract】ObjectiveToresearchoneofitsmechanismsmediatedbytheactivationofmacrophagesinmurinecavityinducedbylentinan（LNT）Methods（1）Observingthephagocyt

3、osisofmacrophagesinmurinecavityinducedbyLNT，（2）Measuringthetumornecrosisfactor（TNF）ofL615leukeamiamiceafterbeinginjectedbyLNT,（3）ApoptosismediatedbyTNFinmacrophagesinducedbyLNT.wasdetectedwithHochest33258fluorochromestainingandDNAelectrophoresis.Resul

4、tsTheratioandindexofphagocytosisofmacrophagesinmurinecavityinducedbylentinan（LNT）wereincreasedsignificantly.Meanwhilecontentoftumornecrosisfactor（TNF）insupernatantofmacrophagesspleniccellsandthymocytesinducedbyLNTwerehigherthanthecontrol.Thecytoxicact

5、ivationofmacrophagesupernatantinducedbyLNTonL615leukeamiacellsroseto66.2%fromthecontrol（11.4%）andexpressedadosedependeantmannerwhenL615leukeamiacellsweretreatedbythemacrophagesupernatantinducedbyLNTDNA,theapoptoticcellswerefound.ConclusionThemacrophag

6、esactivatedbyLNTshowshighcytotoxicactivationontumorcells,andoneofitsmechanismsofanti-tumorcellsistheapoptosismediatedbyTNFinmacrophagesinducedbyLNT.【Keywords】lentinan；macrophage；TNF;apptosis现代研究证明，香菇多糖（LNT）可调节人体内有免疫功能的T细胞活性，可降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力。香菇对癌细胞有强烈的抑制

7、作用。从细胞凋亡（Apoptosis）的角度探讨抗肿瘤途径是目前医学研究的热点。细胞凋亡机制比较复杂，而且不单纯是一个生理过程，它与很多免疫的发生发展有着重要的关系［1,2］。利用某些手段诱导肿瘤细胞凋亡进而发挥抗肿瘤目的是本课题出发点。我们利用LNT诱导活化巨噬细胞进而介导肿瘤细胞凋亡，起到抗肿瘤效果，更符合生物自身防御原则，达到扶正固本的作用。31材料与方法1.1巨噬细胞功能测定615纯系小鼠（4～6周龄，中国医科院血研所动物中心）静脉注射LNT［Lentinusedodes（Berk）Sin

8、g干燥子实体中提取，福建梅峰制药厂］66.7mg/㎏体重，qd×7d，停药第2天，腹腔注射5％鸡红细胞（CRBC）生理盐水0.5ml／只，8～12h后收集腹腔巨噬细胞。于载玻片上37℃温育30min，甲醇固定Giemsa－wright染液染色，油镜观察，计算吞噬百分率和吞噬指数，进行组间t检验。1．2肿瘤坏死因子（TNF）的测定收集，腹腔巨噬细胞，800g离心20min，沉淀细胞经Hank’s液（含10%的FBS）沉淀2次。用CM调细胞浓度为5×106/ml，于24孔培养孔板37℃