香菇多糖对荷瘤小鼠tdcs表达的影响论文

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1、香菇多糖对荷瘤小鼠TDCs表达的影响论文林卡莉，林卡勤，钟瑞冲，贺方兴，陈卫琴【摘要】目的探讨香菇多糖对荷瘤小鼠S100+胸腺树突状细胞(TDCs)和CD1a+TDCs表达的影响。方法观察胸腺结构;通过S100和CD1a免疫组化标记，计算S100+细胞在参照物(胸腺)中所占面积百分比;计算TDCs密度;测算胸腺指数，肿瘤指数，抑瘤率等指标。结果荷瘤香菇多糖组TDCs数量明显增加.freelusS100+dendriticcells(DCs)andCD1a+DCsinS180tumor-bearingmice.Me

2、thodsThymusmorphologyandthymusDCs(TDCs)immunostainingarker(includingS100andCD1a)ethod.Thethymusindexandtumorindexeasured.ResultsThereoreTDCsinthetumorlentinangroupthanothers,especiallyincortex,locatingbetphocytes.S100+TDCsareaandTDCsdensityinthetumorlentinang

3、roupotequantityincrease,differeationandmaturationofTDLs.Keymunohistochemistry中医理论认为香菇味甘性平，健脾益气，调和阴阳，食药兼用，民间还用其辅助治疗多种病症。从香菇的子实体提取物中获取的主要有效成分——香菇多糖，作为一种天然的免疫调节剂，对各种恶性肿瘤有较好的防治作用1。研究报道，香菇多糖可增强肿瘤组织内浸润淋巴细胞的扩增，在实验动物中有促进B淋巴细胞的分化、增殖，增强免疫功能的作用2,3。Mushiake等4的研究结果还表明：香菇多

4、糖能通过改善树突状细胞(dendriticcells,DCs)功能，调节DCs介导的特异性免疫，增强抗瘤活性，最终提高荷瘤鼠的存活率。本课题组的前期研究工作也证实香菇多糖抗肿瘤作用与增加免疫细胞数量有关，可使脾指数增加，脾白髓面积与脾小体个数增加，使外周血淋巴细胞绝对数增加5,6。在此基础上，我们重点观察了香菇多糖对荷瘤S180鼠胸腺结构，特别是对胸腺树突状细胞(thymusdendriticcells,TDCs)分布和数量的影响，以及与肿瘤消长的关系，以期进一步为香菇多糖促进中枢免疫器官功能，加强抗肿瘤作用的研

5、究提供实验依据。1材料1.1材料与试剂小鼠S180细胞株(Sara180)由中国医学科学院医药研究所购进，本院科研中心传代培养。兔抗小鼠S100，兔抗小鼠CD1a和SABC试剂盒，均购自武汉博士德生物工程有限公司。注射用香菇多糖生产厂家：南京康海药业有限公司。环磷酰胺生产厂家：江苏恒瑞医药股份有限公司。DT2000图像分析软件V2.0。SPSS14.0统计软件包。1.2荷瘤S180鼠模型的建立取已接种7d肿瘤生长良好的S180腹水型小鼠，抽吸乳白色的浓稠腹水以无菌生理盐水稀释后，用血球计数板进行活细胞计数，调整细

6、胞数为1×107，制成肿瘤细胞悬液(活细胞率﹥95%)。在小鼠右前腋皮下注射0.2mlS180细胞悬液，制成实体瘤模型。2方法2.1动物及分组清洁级昆明小鼠40只，雌雄各半，6～8周龄，体质量20～24g，购自江西中医学院实验动物中心，卫生许可证号：SCXK(赣)2006-0001，实验动物质量合格证号：JZDoticImagesPlus2.0ML软件计算TDCs密度：每组随机选取50个高倍视野拍照(0.068mm2)，计数S100+细胞的个数。TDCs密度=50个高倍视野S100+细胞总和/3.4mm2(阳性颗

7、粒最小直径≥2μm时认作一个细胞)。2.4胸腺指数，肿瘤指数，抑瘤率的计算胸腺指数(mg/g)=胸腺质量(mg)/小鼠体质量(g);肿瘤指数(mg/g)=肿瘤质量(mg)/小鼠体质量(g);抑瘤率(%)=(荷瘤模型组肿瘤质量-荷瘤药物实验组肿瘤质量)/荷瘤模型组肿瘤质量×100%。2.5统计学处理采用统计学软件包SPSS14.0，结果用±s表示，各实验组之间的比较采用单因素方差(ANOVA)分析，显著性水准为α=0.05。3结果3.1光镜观察正常对照组小鼠胸腺皮质密集分布着核深染的小淋巴细胞，髓质结构较疏松，淋巴

8、细胞成分较少。在胸腺皮质、髓质以及皮髓质交界处，均分布着一些体积较大、胞体呈多角形或分支状，核形状不规则的浅染细胞，即为TDCs。荷瘤香菇多糖组TDCs数量明显增加，特别在胸腺皮质密度很高，位于成簇的淋巴细胞之间，树状突起与淋巴细胞相接触。3.2各组小鼠胸腺指数、肿瘤指数和抑瘤率的比较荷瘤小鼠与正常对照组相比，胸腺指数均下降，尤其是荷瘤环磷酰胺组下降更为明显。应用香菇多糖