pcr_dgge指纹技术与分离技术结合筛选藏灵菇奶发酵过程优势菌

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1、中国农业科学2006,39(8):1632-1638ScientiaAgriculturaSinicaPCR-DGGE指纹技术与分离技术结合筛选藏灵菇奶发酵过程的优势菌周剑忠，董明盛，江汉湖（南京农业大学食品科技学院，南京210095）摘要：【目的】获得藏灵菇发酵奶发酵过程的优势菌，并开发出纯培养发酵剂替代藏灵菇进行这类新型发酵奶的工业化生产。【方法】将PCR-DGGE指纹技术和传统培养方法结合，对藏灵菇发酵奶中微生物种群结构进行研究。【结果】DGGE指纹图谱显示混合菌群中细菌有4条条带无对应的纯菌株，而纯菌株中有2株在混合菌群的图谱上没有相应的条带。通过对150株分

2、离菌的PCR-DGGE指纹图谱分析，获得了8组乳酸菌和5组酵母菌，进一步的序列分析和相似性比较，确立了藏灵菇发酵奶中的优势菌为肠膜明串珠菌、乳酸乳球菌、开菲尔乳杆菌、干酪乳杆菌和克鲁维酵母，单孢酵母、啤酒酵母、假丝酵母发酵后期成为优势菌。【结论】本研究建立了一种基于分子生态的微生物高效筛选技术，为藏灵菇纯培养发酵剂的开发提供了理论依据及丰富的菌种资源。关键词：藏灵菇；PCR-DGGE；微生物多样性；优势菌；筛选ScreenofDominatingMicrobialSpeciesIsolatedFromTibetanKefirUsinganIntegratedAppro

3、achofPCR-DGGEandCulture-DependentMethodsZHOUJian-zhong,DONGMing-sheng,JIANGHan-hu(CollegeofFoodScienceandTechnology,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095)Abstract:【Objective】ToscreendominatingmicrobialspeciesisolatedfromTibetanKefiranddeveloppure-culturestarter.【Method】PCR-DGGEand

4、traditionalculture-dependingmethodswerecombinedtoexaminethemicrobialcommunityofTibetankefir.【Result】FourbandsintheDGGEprofilesoftotalbacterialDNAofTibetankefirwerenotrecoveredbycultivation.Conversely,twobacterialspeciesdidnotexhibitbandsinDGGEfingerprintsoftotalbacterialDNAofTibetankefi

5、r.150strainsisolatedwerescreenedandgroupedbyPCR-DGGE,eightlacticacidbacteriaandfiveyeastswereobtained.Comparisonof16SrDNA(bacteria)and26SrDNA(yeast)partialsequencesimilarityrevealedthatthedominatingmicrobialspeciesofTibetankefirwereLeuconostocmesenteroides,Lactococcuslactis,Lactobacillu

6、skefiri,LactobacilluscaseiandKluyveromycesmarxianus,Saccharomycesunisporus,SaccharomycescerevisiaeandCandidahumilisweredominatingduringlastfermentation.【Conclusion】Aneffectivemicrobialscreeningtechnologybasedonmolecularmicrobiologywasestablishedinthisstudy,providingtheoreticalbasisandri

7、chmicrobialresourcesforthedevelopmentofTibetanKefirpure-culturestarter.Keywords:Tibetankefir;PCR-DGGE;Microbialdiversity;Dominatingmicrobialspecies;Screen免疫力，补充维生素，延缓衰老，消除疲劳，特别适0引言合胃病、肾病、肝胆病患者。藏灵菇不是菇类（大型【本研究的重要意义】目前民间流行用藏灵菇泡真菌），它是一种乳白色、胶质状的块状物（由微生牛奶，待牛奶酸化后饮用，据说长期饮用能增强人体物产生的胞外多糖