奶豆腐中乳酸菌的分离筛选-论文.pdf

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1、中国饲料添加剂2013年第9期(总第135期)奶豆腐中乳酸菌的分离筛选王永兴(青岛动物园)摘要：国内饲用微生物研究始于20世纪80年代，主要研究领域包括菌种资源、不同健康状态下动物消化道菌群演变规律、动物肠道菌群平衡与作用机制、动物肠道微生态分子检测技术、微生物添加剂应用等方面。目前国家农业部已将饲用微生物列入了饲料添加剂目录，允许作为微生物饲料添加剂的菌种由、1994年的6种增加到2006年的l6种，主要是以乳酸菌、粪链球菌、芽孢杆菌、酵母茵、片球菌和光合细菌等为主。本研究的主要内容为从奶豆腐中筛选一株乳酸菌，进而研

2、究该乳酸菌用于饲料的可行性。关键词：乳酸菌；分离；筛选；饲用微生物IsolationandScreeningofLactobaciUusfromFermentedMilkCurdWangYongxingAbstract：Theresearchonmicrobialfeedadditivebeganin1980s，includingstrainre—sources，animaldigestivetractfloraevolutionatdifferenthealthstates，animalintestinalflora

3、balanceandmechanismofmicroecology，moleculardetectiontechnology，andtheapplicationofmicrobialfeedadditives．Atpresent，microbialhasbeenincludedinthelistoffeedadditivefor—mulatedbytheministryofagriculture，andstrainscanbeusedasfeedadditiveincreasedfrom6in1994to16in200

4、6，mainlyincludingLactobacillus，Streptococcusfaecalis，Bacillus，yeasts，Pedio~~OCCHSandphotosyntheticbacteria．ThisstudyselectedastrainofLactobacillusfromfer—mentedmilkcurd，andstudieditsfeasibilityusedinfeed．KeyWords：Lactobacillus；isolation；screening；microbial微生态制剂是

5、指能改善动物胃肠道微生物酸等有机酸和过氧化氢外，还能产生多种具有抑生态平衡，有益于动物健康和生产性能发挥的一菌或杀菌生物活性的细菌素(bacteriocin)，在抑类微生物饲料添加剂，其主要功能包括：①改善制多种病原微生物和食物腐败菌等方面具有重消化道内微生态平衡，刺激胃肠非特异性局部免要的作用。疫，产生干扰素，提高免疫球蛋白的浓度和巨噬这种新型的生物制剂正以其独特的功能影细胞的活性，增强机体免疫力和抗病能力；②改响着日益发展的畜牧业，随着微生态学研究的进善机体代谢，补充机体营养成分，并可分泌杀菌一步深入以及人们对绿色

6、、安全和环保意识的不物质，产生有机酸、溶菌酶、过氧化氢等物质；③断增强，微生态制剂的应用前景非常广阔。利用乳酸菌定植肠道产生乳酸，形成酸性环境，本研究主要内容为从奶豆腐中筛选一株乳抑制病原菌繁殖，达到促长防病目的；④微生态酸菌，并论证其用于饲料的可行性。制剂可以降低消化道和粪便的pH值，pH值的1试验材料与方法降低可抑制腐败微生物的作用，从而有利于生态1．1乳酸菌分离方法环境的保护。许多乳酸菌代谢除了产生乳酸、乙取少量样品接入11％脱脂乳(m／V)中，王永兴：奶豆腐中乳酸菌的分离筛选一27—37~C培养，凝乳后取样逐级

7、稀释，选3个适宜的和蛋白。上清液加入两倍体积冷无水乙醇，4~C稀释度，每个稀释度取0．1mL涂布于MRS琼脂放置过夜，10000r／min离心30min，沉淀用蒸馏平板，37~C培养48h。选取合适的平板，挑取典水悬起，再加两倍体积冷无水乙醇，4~C放置过夜型菌落进行革兰氏染色和过氧化氢酶试验，其中后于lO000r／min离心30min，沉淀用50mL蒸馏革兰氏染色阳性和过氧化氢酶试验阴性的菌株水悬起，装入分子截流量(MWCO)为8000～初步鉴定为乳酸菌，继续划线培养分离纯化，直12000的透析袋中透析24h，每8h

8、换一次水。采至得到纯菌，纯化后的菌株接种到MRS液体培用苯酚硫酸法测定胞外多糖含量，测定490nm养基培养后，加入20％甘油，一80~C冰箱保存备波长处的吸光度，用葡萄糖溶液作为标准。胞外用。多糖含量为样品糖含量减去未接种乳酸菌的空1．2乳酸菌属的鉴定白培养基的背景干扰值。根据文献资料介绍，乳杆菌属的生化特征是1．6乳酸菌48h内