氨基酸的分离鉴定ppt课件.ppt

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1、实验二氨基酸的分离鉴定纸层析法【实验目的】1.通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。2.掌握氨基酸纸上层层析法的操作技术（点样、平衡、展层、显色、鉴定）。【实验原理】纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，是分配层析的一种。在纸上水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相。当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上溶质就在水相和有机相之间进行分配，溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。层析溶剂由有机溶剂和水组成。物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移）来表示的：原点到溶剂前沿的距离原点到层析点中心的距离在一定的条件下某种物质的Rf值

2、是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、PH层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。Rf＝实验仪器1．层析缸、培养皿、小烧杯、长颈漏斗2．毛细管、吹风机、电热鼓风干燥箱3．层析滤纸、手套、透明胶带或针线实验材料和试剂1．氨基酸溶液　分别配制0.5%的Lys、Alu、Ile、Met溶液及它们的混合液（各组份浓度均为0.5%）。2．显色剂　0.1%水合茚三酮丙酮溶液。3．扩展剂（展层剂）酸溶剂系统：正丁醇:80%甲酸:水＝15:3:2（体积比），平衡溶剂与扩展剂相同。每组配制30ml碱溶剂系统：正丁醇:12%氨水:95%乙醇＝13:3:3（体积比），平衡溶剂为12%氨水。

3、实验流程溶剂前沿层析点原点溶剂前沿亮苯丙缬脯赖1．将盛有扩展剂10ml的小烧杯和培养皿置于密闭的层析缸中。2．戴手套取层析滤纸一张作标记。3.点样干后重复点一次，直径最大不超过3mm。缝成筒状，两边不能接触。点样面朝外，点样端朝下，盖上层析缸盖，平衡约20～30分钟。4.展层　用长颈漏斗，扩展剂的液面需低于点样线1cm。上沿约1厘米时，取出滤纸，用铅笔标出溶剂前沿界线，干燥。5.显色　用0.1%茚三酮丙酮溶液均匀浸透，烘箱（65℃）5分钟或用热风吹干。脯氨酸、羟脯氨酸产生黄色物质外，所有α－氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮产生兰紫色物质。实验结果与讨论注意事项1．切勿用手直接

4、接触滤纸和显色剂。2.点样过程中必须在第一滴样品干后再　　点第二滴。3．使用的溶剂系统需新鲜配制，并要摇匀。