氨基酸的分离与鉴定

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1、实验一氨基酸的分离与鉴定——滤纸层析法目的要求（1）通过实验，了解氨基酸滤纸层析法的原理。（2）掌握氨基酸滤纸层析的操作方法。原理滤纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析（它也并存着吸附和离了交换作用）。滤纸纤维上耗基具有亲水性，因此吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。有机溶剂口上而下流动称为下行层析，口下而上流动称为上行层析。流动相流经支持物吋，与固定相之间连续抽提，使物质在两相间不断分配而得到分离。溶质在滤纸上的移动速率用R「值表示：口悄_原点到层析斑点中心的距离2_—原点刘溶剂前缘的距离溶质结构、溶

2、剂系统物质组成与比例、pH值、选用滤纸质地和温度等因素都会影响Rf值。此外，样品中的盐分、具他杂质以及点样过多皆会彩响样品的有效分离。无色物质的纸层析图谱可用光谱法（紫外光照射）或显色法鉴定。氨基酸纸层析图谱常用的显色剂为即三酮或卩引味醞，本实验采用前三酮为显色剂。本实验用单向上行层析法作标准氨基酸的标准曲线,用双向上行纸层析法作几种已知氨基酸的层析图谱。然后将其中的谷氨酸和天冬氨酸加以定量测定。试剂和器材—、试剂（1）8X10'3mol/L谷氨酸和8X10'3mol/L天冬氨酸混合液。（2）谷氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺

3、、y■氨基丁酸和内氨酸混合液（已知氨基酸混合液）。将以上氨基酸分别配制成8Xl（r3mol/L的浓度，然示混合之。（3）即三酮重结晶方法：即三酮有时由于包装不好或放置不当常带微红色，需重结晶方可使用。5g前三酮溶J：15mL热水，加入0.25g活性炭轻轻搅动，若溶液太浓不易操作，可酌量加5-lOmL热水，加热30min后趁热过滤（用热滤漏斗，以免茁三酮遇冷结品而损失），滤液直冰箱内过夜，次H辰即见黄白色结晶出现，过滤，再以lmL冷水洗涤结晶，置于干燥器屮干燥，最后装入棕色瓶内保存。（4）0.1%硫酸铜（CuSO4•5H

4、2O）:75%乙醇=2:38硫酸铜难溶于乙醉，将硫酸铜肓接用75%乙醉溶解不能得到澄清溶液，如将硫酸铜溶液和乙醇混合后，放置过久则会有沉淀析出，因此，必须在临用前按比例混合。正丁醇（需重蒸），95%乙醇，88%甲酸，12%氨水（因氨易挥发，稀释前需测出毕重）。（）.5%前三酮丙酮溶液。二、器材新华中速薄层析滤纸，层析缸（高约430mm,直径约290mm,具有磨口盖子），鼓风实验一氨基酸的分离与鉴定——滤纸层析法目的要求（1）通过实验，了解氨基酸滤纸层析法的原理。（2）掌握氨基酸滤纸层析的操作方法。原理滤纸层析是以滤纸作

5、为惰性支持物的分配层析（它也并存着吸附和离了交换作用）。滤纸纤维上耗基具有亲水性，因此吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。有机溶剂口上而下流动称为下行层析，口下而上流动称为上行层析。流动相流经支持物吋，与固定相之间连续抽提，使物质在两相间不断分配而得到分离。溶质在滤纸上的移动速率用R「值表示：口悄_原点到层析斑点中心的距离2_—原点刘溶剂前缘的距离溶质结构、溶剂系统物质组成与比例、pH值、选用滤纸质地和温度等因素都会影响Rf值。此外，样品中的盐分、具他杂质以及点样过多皆会彩响样品的有效分离。无色物质的纸层

6、析图谱可用光谱法（紫外光照射）或显色法鉴定。氨基酸纸层析图谱常用的显色剂为即三酮或卩引味醞，本实验采用前三酮为显色剂。本实验用单向上行层析法作标准氨基酸的标准曲线,用双向上行纸层析法作几种已知氨基酸的层析图谱。然后将其中的谷氨酸和天冬氨酸加以定量测定。试剂和器材—、试剂（1）8X10'3mol/L谷氨酸和8X10'3mol/L天冬氨酸混合液。（2）谷氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、y■氨基丁酸和内氨酸混合液（已知氨基酸混合液）。将以上氨基酸分别配制成8Xl（r3mol/L的浓度，然示混合之。（3）即三酮重结晶方法：即三酮有时

7、由于包装不好或放置不当常带微红色，需重结晶方可使用。5g前三酮溶J：15mL热水，加入0.25g活性炭轻轻搅动，若溶液太浓不易操作，可酌量加5-lOmL热水，加热30min后趁热过滤（用热滤漏斗，以免茁三酮遇冷结品而损失），滤液直冰箱内过夜，次H辰即见黄白色结晶出现，过滤，再以lmL冷水洗涤结晶，置于干燥器屮干燥，最后装入棕色瓶内保存。（4）0.1%硫酸铜（CuSO4•5H2O）:75%乙醇=2:38硫酸铜难溶于乙醉，将硫酸铜肓接用75%乙醉溶解不能得到澄清溶液，如将硫酸铜溶液和乙醇混合后，放置过久则会有沉淀析出，因此

8、，必须在临用前按比例混合。正丁醇（需重蒸），95%乙醇，88%甲酸，12%氨水（因氨易挥发，稀释前需测出毕重）。（）.5%前三酮丙酮溶液。二、器材新华中速薄层析滤纸，层析缸（高约430mm,直径约290mm,具有磨口盖子），鼓风恒温箱，国产72型分光光度计，水浴锅，喷雾器，电吹风机，点样架，点样管，加溶剂的漏斗，针、线和尺子，橡皮