氨基酸的分离鉴定-滤纸层析法

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1、氨基酸的分离鉴定―滤纸层析法通过氨基酸的分离：1.学习纸层析法的基本原理；2.掌握滤纸层析的操作方法。目的一.滤纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。以水（被滤纸纤维结合）作为固定相，以有机溶剂为流动相，样品点在滤纸上进行展层，氨基酸在两相中不断分配，因为分配系数不同，故样品随流动相移动的速率不同，从而被分开，形成距原点距离不等的层析点。原理原理二.氨基酸被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移)来表示的Rf=原点到层析中心的距离/原点到溶剂前沿的距离(在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸

2、的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。)显色原理无色物质的纸层析图谱可用光谱法（紫外光照射）或显色法鉴定。氨基酸纸层析图谱常用的显色剂为茚三酮或吲哚醌，本实验采用茚三酮为显色剂。器材1、玻璃钟罩2、毛细管3、喷雾器4、培养皿5、层析滤纸(新华一号)6、烘箱7、铅笔（直尺）8、裁纸刀9、一次性手套10、分液漏斗11、吹风机12、移液管等常规仪器1、物质的量为0.008摩尔/升的赖氨酸、亮氨酸、天门冬氨酸、丙氨酸溶液及它们的混合液(各组份物质的量均为0.008摩尔/升)。2、扩展剂正丁醇：甲酸：水=70:17:8（体积比）3、显色剂2

3、.5％茚三酮丙酮溶液。试剂1、准备滤纸取层析滤纸(15*17cm，距下端2cm处用铅笔划一条与底边平行的直线，在此直线上每间隔相等距离作一记号，一共做五个记号（点样用）。2、点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在中间5个记号上，自然风干（或冷风）后再点一次样，每点在纸上扩散的直径，最大不超过5mm。操作（单向上行层析法）操作3、展层用订书机将滤纸订成筒状，纸的两边不能接触。将滤纸竖直立于培养皿中（有铅笔线的一端朝下），用玻璃钟罩盖住，用层析柱与漏斗从钟罩上口处加展开剂至培养皿高度2/3处，盖上上口盖子，待溶剂前沿上升至距顶端约1cm时取出滤纸，用铅笔描出

4、溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机冷风吹干。4、显色用喷雾器均匀喷上2.5％茚三酮丙酮溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(65℃)即可显出各层析斑点。5、计算各种氨基酸的Rf值。1、整个实验为什么要戴手套进行，且滤纸要妥善保存？2、为避免实验结果出现“拖尾”现象，实验操作中应注意哪些环节？3、为什么几种氨基酸在滤纸上会出现上下分布？结合实验原理说说选择其他氨基酸可能会有什么现象。思考题祝实验成功！Theend谢谢！