实验一氨基酸的分离鉴定教学内容.ppt

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1、实验一氨基酸的分离鉴定层析法根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。纸层析属于分配层析法。分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数不同而得到分离。纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。溶质中各组分的分配系

2、数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。一种物质在两种溶剂中的浓度之比是一个常数，也就是分配系数（a）。物质在溶剂I中的浓度a=———————————物质在溶剂II中的浓度物质被分离后在纸层析图谱上的位置用Rf值来表示：原点到层析点中心的距离Rf=—————————————原点到溶剂前沿的距离某一种物质在特定的溶剂系统、纸、展层方式、温度、pH等条件下的Rf值基本上是常数。茚三酮颜色反应：1）蓝紫色化合物，570nm2）黄色化合物，440nm赖氨酸脯氨酸（黄色）缬氨酸苯丙氨酸亮氨酸三、器材1、层析缸；2、培养皿；3、毛细管；4、喷雾器；5、层析滤纸四、试剂扩展剂：4份水饱和的正丁醇

3、和1份醋酸的混合物；（被滤纸吸附的水为固定相，正丁醇为流动相，乙酸为层析提供酸性环境。）氨基酸溶液:0.5%的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液（各组分均为0.5%）；显色剂：0.1%水合茚三酮正丁醇溶液五、操作：1、平衡：将盛有平衡溶剂的培养皿放入密闭的层析缸中；2、滤纸：在纸的一端距边缘2cm处用铅笔划一条直线，在直线上每隔1cm作一记号，共6个记号，这个记号是样品Rf值计算的原点；3、点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在这6个位置上，每点一次样，用吹风机吹干，然后再点一次；重复点样2次。注意：点样时毛细管垂直轻轻接触滤纸，一触即止，每个点在纸上扩散的直径

4、最大不超过3mm。4、扩展：用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。滤纸直立于培养皿中，点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线。待溶剂上升10cm时取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线，吹风机吹干。5、显色：用喷雾器均匀喷上0.1%茚三酮正丁醇溶液，用热风吹干显出个层析斑点（氨基酸与茚三酮共热反应显色）。六、结果与分析：计算各种氨基酸的Rf值。此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢