复方中药对免疫抑制小鼠免疫促进作用探究

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1、复方中药对免疫抑制小鼠免疫促进作用探究  [摘要]目的从细胞及分子水平,探求中药复方对免疫功能增强的作用及效能,在扶正固本、活血益气的中药中遴选出有广阔应用前景的促进免疫的中药复方。方法50只昆明小鼠随机分成正常对照组、模型对照组与高剂量中药组、中剂量中药组、低剂量中药组。用环磷酰胺抑制小鼠免疫功能制作免疫抑制模型,观察用药后正常对照组、模型对照组与高剂量中药组、中剂量中药组、低剂量中药组血清IgG、补体C3,脾淋巴细胞表面抗原标志物CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+、CD49b+,脾淋巴细胞细胞因子IL-2和IFN-γ及体重和脾指数。结果与模型对照组相比,

2、高剂量中药组、中剂量中药组、低剂量中药组体重和脾指数、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+差异无统计学意义(P>0.05),低剂量中药组血清IgG降低[(177.19±45.66)g/L],CD49b+、补体C3及脾淋巴细胞细胞因子IL-2和IFN-γ升高[(32.43±6.31)%、(294.0±61.2)g/L、(38.44±7.82)%、(22.11±6.29)%],差异均有统计学意义(均P  [Keywords]Promotionofimmunity;CompoundChinesemedicine;Mice9免疫学是现代医学发展极为迅速的学科之一,疾病

3、发生发展很多都与免疫功能有关,某些肿瘤患者在放疗、化疗后或一些病毒感染后致免疫性力低下,但临床增强免疫力有明显临床疗效的药物却不多见。祖国医学认为“正虚邪扰”,疾病与人体的抵抗力密切相关,并且临床处方运用扶正祛邪的法则治疗疾病,临床观察亦有疗效,许多学者研究了多种单味药对免疫功能的调节作用,尝试发现、提取、合成能调节免疫的化合物,本实验旨在从细胞及分子水平出发,探求中药复方对免疫功能增强的作用及效能,在扶正固本、活血益气的中药中遴选出有广阔应用前景的促进免疫的中药复方。1材料与方法1.1材料1.1.1中药的制备复方中药(由西洋参、黄芪、枸杞、当归等多味药)组成,按总量400g(西洋参

4、96g、黄芪96g、枸杞128g、当归80g)称取处方各药(由江西省人民医院药剂科供应),加蒸馏水400mL,浸泡24h,隔水煮1h,滤过药液,药渣再加蒸馏水适量,煮1h,滤出药液,合并两次药液,隔水浓缩至400mL,即每1mL相当于1g生药的原液,灭菌封存备用。1.1.2实验动物96周龄昆明小鼠50只,体重(20±2)g,雌雄各半,均购自江西中医学院。动物自由饮食、饮水,动物质量合格证号:JIDWNO.2012-0041。试验过程中对动物的处置符合2006年科技部关于对试验动物的有关规定[1]。1.1.3试剂与仪器免疫抑制剂环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司,批号:12030625

5、),为200mg/支的粉针剂;小鼠IgG和补体C3的ELISA检测试剂盒为西唐生物公司进口分装产品(批号分别为:1208061、1208201);Anti-MouseCD3(PE-Cy5)、Anti-MouseCD4(FITC)、Anti-MouseCD8(PE)、Anti-MouseCD19(PE)、Anti-MouseCD49(FITC)、Anti-MouseIL-2(PE)、Anti-MouseIFN-γ(FITC)荧光抗体(购于eBioscienceInc.SanDiego,CA公司,批号分别为E06065-1630、E00077-1630、E01036-1633、E0104

6、7-1630、E00752-1630、E02060-1630、E00862-1631);BECKMANCOULTER流式细胞仪;酶标仪(550型);倒置显微镜(Leica);光学显微镜(OLYM-PUS);红细胞裂解液(实验室制自备);PBS缓冲液(实验室制自备);16号小鼠灌胃针;Allegra64R低速冷冻离心机(BECKMANCOULTER,rmax=204mm);HC电子天平(0.1g)、sarrorious电子天平(0.001g),300目金属筛网。1.2方法1.2.1药物急性毒理试验9该复方中药各组份临床应用广泛,未见明显毒副作用,因此用小鼠灌胃最大容量0.4mL/10g

7、[2]来检查药物的LD50,取20只小鼠,每次灌胃复方中药0.8mL,2次/d,观察15d,无一死亡,可见LD50>0.4mL/10g。1.2.2实验分组应用随机数字表法进行随机将动物分为5组:正常对照组、模型对照组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组。每组10只,雌雄各半。将需随机分组的雌雄性小鼠分别称重,按序编号记录体重结果,给每只小鼠鼠分配一个随机数,按随机数字大小升序排序,按排序后的顺序依次将小鼠分入各个剂量组。各组体重均值再做F检验(单因素

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