复方HD对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影响

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1、分类号：R967单位代码：10159密级：公开学号：201420652硕士学位论文中文题目：复方HD对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影响英文题目：ImmunomoduLatoryeffectsofFuFangHDoncyclophosphamide-inducedimmunosuppressioninmice论文作者：吕欢指导教师：姜明燕教授学科专业：药物分析学完成时间：2018年3月中国医科大学硕士学位论文复方HD对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影响ImmunomodulatoryeffectsofFuFangHDoncyclophosphamide-inducedimmu

2、nosuppressioninmice论文作者吕欢指导教师姜明燕教授申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科药学二级学科药物分析学研究方向中药免疫药理学论文起止时间2016年3月—2018年3月论文完成时间2018年3月中国医科大学（辽宁）2018年5月I中国医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：本论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究成果，论文中除加以标注的内容外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本研究提供贡献的其他个人和集体均已在文中进行了明确的说明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人

3、承担。论文作者签名：日期：年月日中国医科大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密（），在年后解密适用本授权书。（保密：请在括号内划“√”）论文作者签名：指导教师签名：日期年月日日期：年月日II中国医科大学硕士学位论文摘要目的：复方HD作为经典的免疫调节经验方剂，具有多年临床应用经验，表现出显著的免疫调节作用。但由

4、于中药复方制剂的成分较多，作用途径复杂，免疫调节的机理不明确以及是否存在毒性等原因，使其难以让世人信服。因此本研究进行了复方HD的急性毒性试验以考察复方HD的安全性，并通过腹腔注射环磷酰胺造免疫抑制小鼠模型，灌胃给予复方HD，通过测定相关免疫指标，探究复方HD发挥免疫调节作用的机制。研究方法：实验一：40只ICR小鼠，6-8周龄，随机分为正常对照组和急毒试验组，每组20只，雌雄各半。由于复方HD所含的中药各组份临床应用广泛，无明显毒副作用，且急毒预实验结果未见明显毒性反应，因此，进行最大给药量试验，即以最大灌胃体积0.4mL/10g，最大给药浓度2.093g/mL，24小时内给药

5、2次，间隔8小时，连续观察14天，记录动物的体质量变化及反应情况。于第15天小鼠摘眼球取血，采用微板法进行血浆谷丙转氨酶（AlanineAminotransferase，ALT）、谷草转氨酶（AspartateAminotransferase，AST）测定；肌氨酸氧化酶法进行血肌酐（Creatinine，CRE）检测；脲酶法进行血尿素氮（BloodUreaNitrogen，BUN）检测，考察复方HD对于肝肾功能的影响，并测定主要器官脏器指数，若器官有明显肉眼可见改变则进行组织病理学检查。实验二：雄性ICR小鼠48只，6-8周龄，随机分为正常对照组、模型对照组、香菇多糖阳性对照组、

6、复方HD低剂量组、复方HD中剂量组和复方HD高剂量组，每组8只，分别以蒸馏水、蒸馏水、香菇多糖（200mg/kg）、复方HD（5g/kg、10g/kg、20g/kg）每日一次灌胃，连续10天；在第4-6天腹腔注射环磷酰胺（40mg/kg）建立免疫抑制小鼠模型。第11天处死小鼠，测定其脾指数、胸腺指数，器官指数=器官质量（mg）/体质量（g）；流式细胞仪检测CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞进行T细胞亚群分析；ELISA法检测血浆IFN-γ和IL-4细胞因子水平；实时荧光定量PCR法检测脾脏转录因子T-bet和GATA-3mRNA的表达水平。结果：实验一：1、急毒试验组小鼠和正常

7、对照组小鼠连续观察14天，状态正常，无死亡，并且两组小鼠的时间-体重变化曲线接近于平行，分析比较两组小鼠第7天和第14天体重，无统计学差异，P＞0.05。2、两组小鼠的心、肝、III中国医科大学硕士学位论文脾、肺、肾主要器官的脏器指数无统计学差异，P＞0.05，并且解剖小鼠未见器官有明显肉眼可见改变。3、两组小鼠血浆AST、ALT、CRE、BUN水平均无统计学差异，P＞0.05。实验二：1、与正常对照组小鼠相比，模型对照组小鼠的体重明显降低；胸腺指数明显下降P＜0.05；CD3+