鸽疱疹病毒pcr检测方法建立和试剂盒研制

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1、鸽疱疹病毒PCR检测方法建立和试剂盒研制　　摘要鸽疱疹病毒（PiHV1）感染是由I型鸽疱疹病毒引起的以幼鸽为主的一种常见病毒性传染病，临床上以鼻炎、结膜炎为主要特征。偶尔也会出现精神沉郁、食欲下降、腹泻、呕吐、神经症状。根据已发表的鸽疱疹病毒的基因序列，设计并合成了一对能特异性扩增鸽疱疹病毒的引物，通过对PCR的退火条件的优化，建立了鸽疱疹病毒的PCR检测方法，对发病鸽子进行诊断。并研制出检测试剂盒，再进一步对该试剂盒的敏感性、特异性和稳定性进行了研究，证明该试剂盒具有很高的敏感性和特异性，并且在-20℃条件下可保存1年以上。关键词鸽疱疹病毒；PCR检测；试剂盒中图分类

2、号S852.65+9.1文献标识码A文章编号1007-5739（2013）12-0229-02EstablishPCRDetectionMethodsandDevelopmentKittoPigeonHerpesvirusXUEMeiZHUANGLin-linDAIDing-zhenZHANGZhi-cheng*（DepartmentofAnimalScienceand5Technology，JinlingInstituteofTechnology，NanjingJiangsu210038）AbstractPigeonherpesvirusinfectionwasaco

3、mmonvirusinfectionsdiseaseoftheyoungpigeoncausedbytypeIpigeonherpesvirus，clinically，rhinitisandconjunctivitiswerethefeatures.Sometimes，theinfectedpigeonsalsoshoweddepression，lossofappetite，diarrhea，vomitingandneurologicalsymptoms.Accordingtothepublishedgenomicsequenceofpigeonherpesviruse

4、s，primersforamplificationPiHV1specifiedfragmentweredesignedandPCRassayofannealingfordetectionPiHV1wasoptimizedsothatcoulddiagnoseontheincidenceofpigeons.ThekittodetectPiHV1wasstudied.Thenwedidaexperimentsaboutkit′ssensitivity，specificityandexpirationdate.Theresultsshowedthatthekithadhigh

5、sensitivityandspecificity.Italsocouldstoreat-20℃foratleastoneyear.Keywordspigeonherpesviruses；PCRdetectionmethods；kit疱疹病毒（herpesviruses）是群中等小的双股DNA病毒，有100个以上成员，根据其理化性质分α、β、γ53个亚科。α疱疹病毒（如单纯疱疹病毒、水痘一带状疱疹病毒）增殖速度快，引起细胞病变。β疱疹病毒（如巨细胞病毒）生长周期长，感染细胞形成巨细胞。γ疱疹病毒（如EB病毒），感染的靶细胞是淋巴样细胞，可引起淋巴增生。疱疹病毒感染的宿主

6、范围广泛，可感染人类和其他脊椎动物。鸽疱疹病毒感染是由I型鸽疱疹病毒（PiHV1）引起的以幼鸽为主的一种病毒性传染病，临床上以鼻炎、结膜炎为特征。感染鸽子也会出现精神沉郁、食欲下降、腹泻、呕吐、神经症状。鸽疱疹病毒于1945年由SMADEL首次报道，自1967年以来，英国、前捷克斯洛伐克、澳大利亚、比利时、匈牙利、德国、法国和意大利已分离到该病毒，在美国也发现了该病毒[1]。欧洲的大多数鸽子都受到了感染，50%以上的鸽子有特异性抗体，比利时60%的鸽舍内有此病毒存在，饲养的鸽子患有呼吸性疾病，能够从82有急性鼻炎鸽子的咽内分离出鸽疱疹病毒[2]。1材料与方法1.1材料与

7、仪器1.1.1病料。从浙江、江苏、安徽、山东、上海、福建6个鸽场采取病鸽的135份血清；鸽细环病毒（TTV）阳性病料、鸽腺病毒（FADV）阳性病料，由金陵科技学院预防兽医学教研室保存。1.1.2试剂。DNA提取试剂盒（Viralnucleicacid5extractionkitⅡ）；2xTaqMasterMix，南京博尔迪生物科技有限公司生产；Goldview核酸染料，赛百盛公司生产；琼脂糖，北京拜尔迪生物科技有限公司；10xTBE；Marker，南京博尔迪生物科技有限公司。1.1.3仪器。PCR仪，圣恩国际有限公司制造；电泳槽，北京鑫科