谷胱甘肽s—转移酶p1基因多态性和胃癌发展相关性探究

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1、谷胱甘肽S—转移酶P1基因多态性和胃癌发展相关性探究　　[摘要]目的分析谷胱甘肽S-转移酶（glutathione-S-transferaseGSTs）P1基因多态性与胃癌发展的相关性，探讨高风险GSTP1-Val等位基因在氧自由基致胃癌中的作用。方法以血液样本、胃癌细胞和相应正常胃黏膜细胞样本为实验材料，采用放射免疫分析法（RIA）测定血浆谷胱甘肽S-转移酶P（GSTP）的含量和活性改变；多聚酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测外周血DNAGSTP1的多态性。结果胃癌、肠上皮化生和不典型增生两种癌前病变组织中GSTP染色的阳性率分别为78.00%（39/50）、48.0

2、0%（24/50）和74.00%（37/50），与正常胃黏膜比较差异有统计学意义（P5个为GSTP阳性，反之则为GSTP阴性作为判断标准。1.3GSTP1基因多态性的检测抽取外周血5mL，常规酚-氯仿法提取DNA。采用PCR-RFLP法进行基因多态性检测：引物序列5′-ACCCCAGGGCTGTATGGGAA-3′和5′-TGAGGGCACAAGAAGCCCCT-3′，扩增后的PCR产物用BsmAⅠ限制性内切酶进行消化。PCR反应体系：分别加10×Buffer（含各0.5μL，TaqDNA酶0.4μL，模板DNA51μL），加去离子水至总体积50μL。30s，循环35次后，72℃延伸10min

3、。酶切反应体系：NETbuffer2μL，内切酶0.5μL，PCR产物DNA12μL，加双蒸水至总体积20μL。将其置于37℃恒温箱中，酶切3h。取酶切产物20μL于2.5%琼脂糖凝胶电泳分离，溴化乙锭染色5min后观察DNA条带。随即对几个GSTP1基因多态型的PCR产物进一步纯化，以ABI377型测序仪行DNA序列测定[5]。1.4统计学方法全部数据用Foxbase建立数据文件，然后用SPSS11.5统计软件包进行分析。所有统计检验均为双侧概率检验。计数资料比较则采用χ2检验。计量资料采用t检验，采用多组间比较的方差分析，两两比较采用LSD-t检验，胃癌的分化程度与GSTP含量及表达的相关

4、性检验采用Spearman等级相关分析，单因素分析采用Log-rank检验。以P　　2结果2.1血浆GSTP含量胃癌、肠上皮化生和不典型增生两种癌前病变组织中GSTP染色的阳性率分别为78.00%（39/50）、48.00%（24/50）和74.00%（37/50）。与正常胃黏膜比较差异有统计学意义（P　　[2]TanXL，MOR，HanWG，etal.Haplotype-taggingsinglenucleotidepolymorphismsintheGSTP1genepromoterandsusceptibilityto5lungcancer[J].CancerDetectionandPr

5、evention，2009，（32）：403-415.[3]Sorensenm，RaaschouNO，BraschAC，etal.InteractionsbetweenGSTM1，GSTT1andGSTP1polymorphismsandsmokingandintakeoffruitandvegetablesinrelationtolungcancer[J].LungCancer，2007，55（2）：137-144.[4]WongRH，ChangSY，HOSW.PolymorphismsinmetabolicGSTP1andDNA-repairXRCCIgeneswithaincreased

6、riskofDNAdamageinpesticide-exposedfruitgrowers[J].MutationResearch，2008，（654）：168-175.[5]YouWC，HongJY，ZhangL，etal.GeneticpolymorphismsofCYP2E1，GSTT1，GSTP1，GSTM1，ALDH2，andODCandtheriskofadvancedpre-canceransgastriclesionsinaChinesepopulation[J].CancerEpidemiolBiomarkersPrey，2005，14（2）：451-458.[6]Rang

7、anathanPN，WhalenR，BoyerTD.CharacterizationofthemolecularformsofglutathianeS-transferaseP1inhumangastriccancercells（KatoⅢ）andinnormalhumanerythrocytes[J].BiochemJ，2005，386（3）：525-533.5[7]邹劲林，石少权，程华.P27