散发帕金森病lrrk2基因g2019s突变探究

《散发帕金森病lrrk2基因g2019s突变探究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、散发帕金森病LRRK2基因G2019S突变探究　　摘要：目的：研究中国粤西地区散发性帕金森病患者LRRK2基因G2019S突变情况。方法：应用聚合酶链反应（PCR）扩增LRRK2基因41号外显子序列，反应产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后用银染法染色。对样本进行DNA双向测序。结果：在71例散发性帕金森病患者中未发现LRRK2基因41号外显子G2019S突变。结论：G2019S突变可能不是中国粤西地区散发性帕金森病的突变位点。关键词：散发性帕金森病；LRRK2基因；基因测序帕金森病（Parkinson’sDisease，PD）是常见的、慢性致残性神经系统变性疾病，在亚洲人群中

2、，其年发病率为1.5/100000～15/100000[1]。临床主要表现为静止性震颤、肌强直、运动迟缓、姿势反射障碍。研究证实，PD是遗传因素和环境因素共同作用的结果。目前已克隆出a-synuclein、UCHL1、LRRK2、NR4A2、park1、DJ-1、parkin等与帕金森病发病相关的基因。在所有已确定的PD基因中，Lrrk2基因是最有可能在典型晚期发病的PD中起作用的基因[2，3]。我们对收集的中国粤西地区散发PD患者进行研究，筛查是否存在LRRK2基因G2019S突变。1对像与方法1.1研究对象871例散发帕金森病患者，均为广东医学院神经内科收集病例，诊断符合

3、帕金森病诊断标准断[4]，并排除非帕金森病的诊断。71例患者，男44例，女27例，年龄46～87岁，平均65.5±8.5岁。1.2研究方法所有患者均取晨起肘静脉血5-10ml（3.8%柠檬酸钠抗凝），常规碘化钾法从白细胞中提取基因组DNA，-20°C保存。聚合酶链反应（PCR）扩增LRRK2基因41号外显子序列，引物正义序列：5’-GCACAGAATTTTTGATGCTTG-3’，反义序列：5’-GAGGTCAGTGGTTATCCATCC-3’，引物由上海生工公司合成。PCR扩增采用12.5ul反应体系，其中包括10×Buffer1.0ul，dNTP（10mmol/L）1.0

4、ul，引物（20umol/L）0.3ul，基因组DNA1.0ul，TaqDNA聚合酶（5u/μ1）0.15ul，H2O9.05μ1。PCR反应条件：95℃，热变性5min，（95℃，30s，退火62℃，35s，延伸72℃，40s）扩增32个循环后延伸72℃，10min，终止反应。反应产物进行8%非变性聚丙烯酰胺凝胶（PAG）电泳。100V电泳2h以后用银染法染色，观察结果。DNA测序，分别对每例样本进行双向测序，测序由上海生工公司完成。2结果871例帕金森病患者的DNA模板，经PCR扩增得到331bp的产物（电泳结果见图1），测序结果经序列对比后未发现LRRK2基因41号外显

5、子G2019S突变（测序结果见图2）。3讨论本研究利用聚合酶链反应（PCR）扩增71例帕金森病患者的DNALRRK2基因41号外显子序列，并对其扩增得到的产物进行测序，结果未发现LRRK2基因41号外显子G2019S突变，提示G2019S突变可能不是中国散发帕金森病的突变位点。Lrrk2基因位于染色体12q11.2-q13.1，全长7584个碱基，其产物称为Lrrk2蛋白，也叫dardarin蛋白，是Paisan[5]等于2004年首先发现，由51个外显子构成，共有2527个氨基酸，富含亮氨酸重复序列。Lrrk2蛋白属于Roco（Rasofcomplexproteins（Ro

6、c）withaC-terminalofRocdomain）蛋白家族中的Ras/GTPase超家族，包括富含亮氨酸的重复单位区（leucine-richrepeatzone，Lrr）、复合蛋白激酶（ROC）、C末端Roc域（COR）、微管相关蛋白激酶激酶激酶（microtubuleassociatedproteinkinasekinase8kinase，MAPKKK）和C末端β螺旋形重复（WD40）五个连续的结构[6]。Lrrk2蛋白是一个具有多种功能的激酶，通过添加磷酸到其它蛋白上从而激活这些蛋白的活性。目前，在Lrrk2蛋白上至少发现了75个氨基酸置换，但发现有致病性的只有

7、R1441C，R1441G、Y1699C、G2019S、I2020T、R1628P和G2385R。体外研究发现，Lrrk2突变会解除激酶活性抑制，诱导神经元轴突和分支的顺行性退化，tau蛋白过度磷酸化，导致神经元细胞程序性死亡。而且，把Lrrk2突变体引入到成年大鼠脑中，也可以发现类似体外培养的情况：该突变体阻止多巴胺神经元生长及诱导产生包涵体[7，8]。位于41号外显子的G2019S突变改变LRRK2蛋白的自身磷酸化，进一步增强底物磷酸化水平，从而导致LRRK2的激酶活性增强产生疾病。Lrrk2突变还