micrornas对帕金森病致病基因lrrk2表达调控机制研究

《micrornas对帕金森病致病基因lrrk2表达调控机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号VDC博士学位论文密级——microRNAs对帕金森病致病基因LRRK2表达调控机制研究MicroRNAsregulatetheexpressionoftheParkinsonDist!aseCausitiveGeneDiseauSiteneLRRK2LKK氏三作者姓名：学科专业：学院(系所)：指导老师：张学伟神经病学湘雅医院唐北沙教授论文答辩日期兰：尘竺二答辩委员会主席中南大学2011年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的

2、地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：兰亟兰!荤学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向

3、社会公众提供信息服务。日期：童竺!!年上月上日◆本研究由以下基金资助：1．国家重点基础研究发展计划搿973计划一(№：2006C'11500700，2011CB510000)2．国家“863一高科技研究发展计划项目(№：2006从02A408)3．国家自然科学基金项目(NO：30770735，30971035，30900469)◆本研究部分工作在中国医学遗传学国家重点实验室完成博士学位论文中文摘要摘要第一部分LRRK2基因相关microRNAs的预测及验证帕金森病(ParkinsonDisease，PD)是一种常见的神经变

4、性疾病。PD的发病机制十分复杂，目前认为其是由遗传因素与环境因素的共同作用所导致的。PD遗传致病机制的研究已取得明显进展，迄今已定位16个PD相关位点，克隆了包括富亮氨酸重复激酶2基因(Leucine．richrepeatkinase2，三艘)在内的11个致病基因，LRRK2不仅是常染色体显性遗传性PD重要致病基因，还与部分原发性PD有关。目前LRRK2基因突变导致PD发生的机制并不十分清楚，但研究提示某些LRRK2致病突变(如G2019S)可能引起其激酶功能增强而具有细胞毒性，并且过表达野生型LRRK2也具有细胞毒性作用

5、。此外LRRK2可能参与PD发生过程中异常蛋白沉积。过表达野生型LRRK2、LRRK2．∞DJ好突变体或LRRK2激酶结构域可加速a-SynucleinA53T的聚集。由此可见，对LRRK2的表达和功能的精确调控在PD发病机制中具有重要作用。MicroRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为21．23个核苷酸的非编码单链RNA分子，由具有发夹结构的约70．90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，有5’端磷酸基和3’羟基，定位于RNA前体的3’端或5’端。在不同组织、不同发育阶段中miRNA的水平

6、有显著差异，这种miRNAs表达模式具有分化的位元相性和时序性(differentialspatialandtemporalexpressionpattems)，因此miRNAs作为参与调控基因表达的分子具有重要意义。本课题将探讨miRNA对LRRK2基因表达调控机制在PD发病机制中的作用。方法：通过UCSCGenomeBioinformatics数据库(http：／／genome．UCSC．edu／)查询LRRK2基因的RefSeq序列，根据查询到的LRRK2基因3'UTR序列运用targetscan(http：／／ww

7、w．targetscan．ore,／)，miranda(http：／／www．博士学位论文中文摘要microma．org／microrna／home．do)等根据LRRK2基因3'UTR序列预测能对其进行转录后调控的microRNAs，从miRbase数据库获得相关microRNAs序列，比对生物信息学软件的预测结果，选择评分值高的microRNAs进行生物学验证。构建野生型及突变型LRRK2基因3'UTR序列荧光素酶报告基因载体，在N2a细胞中与miRNAs瞬时共转染，于转染后24小时及48小时进行荧光素酶活性分析，验证

8、miRNAs对LRRK2基因mRNA的转录后抑制作用。瞬时转染miRNAs进入HEK293细胞系，于转染后24小时及48小时检测内源性LRRK2蛋白表达水平。根据共转microRNA后荧光素酶报告系统活性以及细胞系体内的内源性LRRK2蛋白表达水平判断，二者均具有统计学意义时判定该microRNA分子对