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《黄芪总黄酮对豚鼠心室肌细胞atp敏感的钾电流的作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、中药黄芪具有显著的益气强心作用。在临床上除了用于治疗冠心病心绞痛外,还能够治疗高血压、低血压、病毒性心肌炎、肾炎、脑梗死、心律失常等［1］。现代药理研究分析，黄芪的化学成分主要含有皂苷类、黄酮类、多糖类以及氨基酸类等。黄酮的不同化学成分，具有不同的药理活性。黄芪总黄酮(totalflavonoidsofastragalus,TFA)是从豆科类植物黄芪中分离出来的有效活性成分，实验表明它具有清除多种自由基的功效，并且对自由基所致细胞膜蛋白质以及DNA损伤有保护作用［2］。ATP敏感的钾电流（ATPsensit
2、ivepotassiumcurrent，IKATP）广泛分布于心肌,在心肌内层细胞呈高密度分布。IKATP具有内向整流特性,电导性强,其活性受细胞内外不同因素调节。确定IKATP的标准为:钾通道的活化不依赖于膜电位的改变,却可被胞内ATP所抑制;可被二磷核苷酸(NDPs)、K通道开放剂所激活,而被格列本脲等特异性抑制剂所抑制。心肌细胞对缺血缺氧呈现多种反应,其中包括IKATP开放,这是机体防御心肌缺血损害的重要机制之一［3］。文献报道，黄芪具有明显抗心肌缺血的作用，但机制不明［45］。本研究旨在用全细胞膜
3、片钳技术观察TFA对豚鼠心室肌细胞IKATP影响,以全面了解TFA抗心肌缺血作用机制。1材料和方法1.1实验材料TFA由内蒙古民族大学有机化学实验室提供，豚鼠（雌雄不拘重300～350g）由内蒙古民族大学基础医学院动物中心提供。1.2溶液配制(1)有钙台氏液（mmol/L）：NaCl143，KCl5.4，CaCl2·2H2O1.8，MgCl2·6H2O0.5，NaH2PO4·2H2O0.25，HEPES5；用NaOH将pH调至7.4。无钙台氏液（mmol/L）：NaCl143，KCl5.4，MgCl2·6H
4、2O0.5，NaH2PO4·2H2O0.25，HEPES5；用NaOH将pH调至7.4。贮存液（mmol/L）：KOH70，Lglutamic50，KCl40，Taurine20，KH2PO420，MgCl2·6H2O3，Glucose10，HEPES10，EGTA1.5，用KOH将pH调至7.4。酶溶液：无钙台氏液+0.4mg/mlcollagenase+0.1mg/mlprotease。(2)记录ATP敏感的钾通道IKATP电极内液(mmol/L):KCl140,MgCl21,CaCl222,CdCl2
5、0.3,TTX0.001,HEPES10,pH7.3。细胞外液：KCl120,KOH20,EGTA5,MgCl21,TTX0.001,HEPES10。(3)TFA按20mg/kg体重加蒸馏水制备成溶液备用。1.3豚鼠心室肌细胞急性分离方法急性处死豚鼠后，迅速开胸取出心脏，置于冰冷有钙台氏液中。行主动脉插管后固定于Langendorff灌流架上逆向灌流心脏，依次使用有钙台氏液1.5min，无钙台氏液6min，酶溶液13min，贮存液3min。灌流完毕后，沿房室沟处剪下心室部分，用眼科剪将心室肌剪成小碎块，置于
6、盛有贮存液的三角烧杯中，于37℃的水浴箱中轻轻振荡10min，吸取上清液置于离心管中，离心5min后弃上清液，加入贮存液，于4℃的冰箱中保存备用。1.4实验分组及数据的采集和处理随机选取心室肌细胞分为正常对照组、TFA20A.对照组;B.TFA组图1TFA对豚鼠心室肌细胞IKATP的影响mg/kg体重组。在实验中，应用Pclamp6.0程序中的Clampex程序记录出原始的心室肌细胞全细胞膜电流图形，再应用Pclamp9.0程序中的Clampfit程序对心室肌细胞IKATP的全细胞膜电流做统计分析。1.5统
7、计学处理计量资料用均数±标准差（±s），用SPSS11.0统计软件进行数据统计，各组之间的数值比较采用样本均数t检验进行统计学分析。P<0.05认为差异有统计学意义。2结果TFA对豚鼠心室肌细胞IKATP的作用，采用全细胞膜片钳技术记录豚鼠心室肌细胞IKATP，将保持电位控制在-40mV使Na+通道失活，电极内液中加入的CdCl2具有阻断钙电流的作用，测试电位从-100mV到+100mV，阶跃命令为10mV，时程300ms，在无缺血、缺氧及代谢受抑制的情况下，一般记录不到IKATP通道的开放，这与文献报道相
8、符。观察封接成功的正常豚鼠心室肌细胞，未发现具有IKATP通道特征的电流活动。而在模拟缺血液灌流30min后，可引出一外向电流,其原始电流曲线，此电流能部分地被Glinbenclamide所抑制，证实为IKATP通道电流。将每一脉冲末期记录到的电流对应电压做图，得到电流电压关系（IV）曲线，IV曲线与X轴相交的电压值即为翻转电位，加入TFA后与对照组比较,IKATP峰值从（0.63±0.38）nA增加到(1.
