宁夏回汉族人群wnt3基因单核苷酸多态性和非综合征型唇腭裂相关性探究

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1、宁夏回汉族人群Wnt3基因单核苷酸多态性和非综合征型唇腭裂相关性探究　　[摘要]目的探讨宁夏回汉族人群中Wnt3基因rs142167和rs7216231位点单核苷酸多态性（SNP）与非综合征型唇腭裂（NSCL/P）的相关性。方法收集宁夏地区回汉族人群非综合征型唇腭裂患者371例为病例组，其中汉族患者166例，回族患者205例；收集患者父亲196例，患者母亲224例，其中150例患者为NSCL/P核心家系；258例健康新生儿为对照组，其中汉族190例，回族68例。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测Wnt3基因多态位点rs142167和rs7216231基因型，对

2、比分析2组的基因型和等位基因，并进行传递不平衡检验（TDT）和以家系为基础的相关性检验（FBAT）分析。结果回汉族人群病例组与对照组比较及其民族分层比较，唇裂、腭裂、唇腭裂及总病例组rs142167和rs7216231位点均无统计学差异（P>0.05）。TDT分析结果显示：rs142167和rs7216231位点的等位基因均不存在过传递（P>0.05）。FBAT分析结果显示：单倍型G-G具有统计学意义（P0.05）inHuiandHanpopulationandinstratifiedcomparison.TDTtestshowedthat7rs142167andrs7216231’sall

3、elehadnotover-transmitted（P>0.05）inNSCL/P.FBATtestshowedthatG-Gspecifichaplotypesshowedstatisticallysignificant（P　　[Keywords]nonsyndromiccleftlipwithorwithoutcleftpalate；Wnt3；singlenucleotidepolymorphism非综合征型唇腭裂（nonsyndromiccleftlipwithorwithoutcleftpalate，NSCL/P）的病因较为复杂，涉及环境与遗传因素及其交互作用[1]。目前已有多个可能

4、相关的候选基因及环境因素，但不同地区甚至不同表型NSCL/P的候选基因有很大差异，研究结果重复性差[2-3]。Wnt家族参与生物体内广泛的生物学效应，影响着生物体的生长发育。2008年Chiquet等[4]报道了Wnt家族的Wnt3基因多态性与NSCL/P有相关性。2010年Menezes等[5]也发现Wnt3基因多态性与NSCL/P有显著相关性。目前，Wnt3基因多态性与NSCL/P的相关性尚未得到广泛的支持及验证，国内也无关于Wnt3基因与NSCL/P相关性的研究报道。本研究选择人口流动性不大、遗传较为稳定的宁夏地区人群为研究对象，以揭示中国宁夏地区回汉族人群中Wnt3基因单核苷酸多态性

5、（singlenucleotidepo-lymorphism，SNP）与NSCL/P是否存在相关性。71材料和方法1.1研究对象收集宁夏地区回汉族人群的SNP患者371例为病例组，其中汉族患者166例，回族患者205例，要求患者家庭至少三代为宁夏籍贯，并且排除其他先天性畸形及综合征型唇腭裂。收集患者父亲196例，患者母亲224例，其中150例患者为NSCL/P核心家系。收集同期在宁夏医科大学总医院出生的258例健康新生儿为对照组，其中汉族190例，回族68例，要求家庭至少三代为宁夏籍贯。1.2聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polyme-rasechainreaction-restric

6、tionfragmentlengthpolymorphisms，PCR-RFLP）检测采集外周血5mL，乙二胺四乙酸抗凝，提取基因组DNA，进行PCR扩增。应用PrimerPremier5.0引物设计软件设计引物和内切酶（表1）。PCR反应体系：待测DNA模板50～100μg、MasterMix12.5μL。上下游引物各2μmol·L-1，用去离子水补足为25μL。反应条件：95℃预变性4min，95℃变性30s，rs14216760℃及rs721623152℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环。PCR产物酶切：取PCR扩增产物5μL，加CfrⅠ限制性内切酶和NmuCⅠ1U及相应的10

7、×buffer1μL，37℃水浴酶切12～167h。电泳分析酶切产物，取10μL酶切产物上样，在3%琼脂糖凝胶上进行电泳，紫外灯下观察结果，确定个体的基因型。随机挑选10%的标本进行直接测序。1.3统计分析对患者及其父母和对照组的基因型分布进行Hardy-Weinberg（HW）平衡检验。采用PASWstatis-tics18软件对患者与对照组的基因型和等位基因进行分析，采用传递不平衡检验（transmiss