低温胁迫下龙眼碳酸酐酶基因(_em_ca_em_)的克隆与表达分析

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1、园艺学报2012，39（2）：243–252http://www.ahs.ac.cnActaHorticulturaeSinicaE-mail:yuanyixuebao@126.com低温胁迫下龙眼碳酸酐酶基因（CA）的克隆与表达分析11,2,*11,31,31陈虎，何新华，罗聪，杨丽涛，黄杏，胡颖123（广西大学农学院，南宁530004；广西农业科学院广西作物遗传改良生物技术重点实验室，南宁530007；广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁530004）摘要：应用蛋白质组学研究低温胁迫下龙眼叶片蛋白质组变化时发现碳酸酐酶（CA）蛋白下调表达。利用RT-PCR方法克隆CA基

2、因的全长cDNA，GenBank登录号JN033201，长度为1119bp，包括1个966bp的开放阅读框，编码321bp的氨基酸序列，同源性分析表明，12个不同植物同源性为81%~88%。龙眼CA基因具有典型的CA结构域，并且非常保守。实时荧光定量分析结果表明，CA在龙眼根、茎、叶中都有表达，为组成型表达，在叶中的表达量最高，茎和根中的表达量最少。CA基因在低温胁迫下随着低温胁迫时间的延长而发生变化。将CA在大肠杆菌中表达，获得1个约40.5kD的外源蛋白。推测CA表达与低温胁迫有关。关键词：龙眼；低温胁迫；蛋白质组学；差异蛋白；碳酸酐酶；基因；克隆；表达中图分类号：S667.2文献标识码：

3、A文章编号：0513-353X（2012）02-0243-10CloningandExpressionofLonganCarbonicAnhydraseGeneUnderLowTemperatureStress11,2,*11,31,31CHENHu，HEXin-hua，LUOCong，YANGLi-tao，HUANGXing，andHUYing12（CollegeofAgriculture，GuangxiUniversity，Nanning530004，China；GuangxiCropGeneticImprovementand3BiotechnologyLaboratory，Guangxi

4、AcademyofAgriculturalSciences，Nanning530007，China；StateKeyLaboratoryforConservationandUtilizationofSubtropicalAgro-bioresources，GuangxiUniversity，Nanning530004，China）Abstract：Theproteinexpressionsoflongan（DimocarpuslonganLour.）underlowtemperaturestresswerestudiedusingproteomicsmethod.Theresultsshowe

5、dthattheexpressionofcarbonicanhydrase（CA）proteinwasdown-regulated.TheCA（GenBankaccessionnumber：JN033201）cDNAobtainedbyRT-PCRwas1119bpoffulllengthwitha966bpopenreadframewhichencodesaputativeCAgenewith321aminoacids.ComparisonoftheaminoacidssequenceshomologyinCAfrom12differentspeciesindicatedthatCAhada

6、rangeof81%to88%identityinaminoacidssequencewithhomologuesofotherplants.ThededucedaminoacidssequencenotonlycontainedatypicalCAdomain，butalsowasveryconservative.Quantitativereal-timePCRresultsshowedthattheCAexpressedinroot，stemandleaf，收稿日期：2011–10–04；修回日期：2012–01–20基金项目：国家科技支撑计划项目（2008BADB8B01，2008BAD

7、B8B02）；广西自然科学基金项目（2011GXNSFA018115）；广西研究生创新计划项目（GXU11T31077）；广西高等学校优秀人才资助计划项目（桂教人201065）*共同第一作者*通信作者Authorforcorrespondence（E-mail：honest66222@163.com）244园艺学报39卷whiletheamountofexpressionsweredifferen