水稻解耦联蛋白cDNA克隆及低温胁迫下UCP1基因的表达分析

《水稻解耦联蛋白cDNA克隆及低温胁迫下UCP1基因的表达分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、摘要摘要UCP基因所编码的解藕联蛋白具有控制能量代谢的重要功能，不仅在在动物普遍存在，近年来又相继在原核生物和某些植物中发现，该基因相当保守且可能发挥着主效基因的作用。本文主要对水稻UCP基因做了初步的研究，包括对来源于经过培育稳定的航天诱变水稻品系971-3及具有相同遗传背景的未诱变水稻971CK品系UCPI,UCP2基因的编码区(CDS)的克隆及测序，UCP1表达情况的检测。在工作伊始，水稻UCP基因序列未知，通过简并引物克隆获得了UCP基因EST的序列，证实为UCPI。另外，本文证实了水稻中UCPI,UCP2的存在。经过克隆、测序列，得到航天诱变

2、品系971-3中的UCP2(UCP2/971-3)序列和对照UCP2(UCP2/CK)序列。UCP2/CK与UCP2/971-3的序列完全一致，结果表明，971-3品系水稻UCP2基因无变化。UCP2/CK同GenBank中的来源于Oryzasativaoaponicacultivar-group品系)的UCP2序列相比有99.4%的同源性。在核昔酸序列的455-457位GenBank中的UCP2比UCP2/CK缺少CGC三个碱基，在460-461位为GC，而UCP2/CK序列是CG，这个差别很可能是品种间的多态性所致。同时，971CK和971-3的U

3、CPI被克隆、测序。结果表明，971CK和971-3两个样品中至少分别有2种同源类似物，命名为UCPIL(long),UCPIS(short)。与GenBank序列比较，发现其中分子量较大的UCPIL与GenBank中UCPI的CDS序列相比多出104个碱基，位于GenBank中的UCPI基因的第四个外显子前面的内含子内。而另一种分子量较小的UCPIS与GenBank中UCPI的CDS序列相比，缺少一段，为52个碱基，位于GenBank中UCPI基因的第6个外显子前部。这是在水稻UCPI研究中首次发现两种UCPI的同源类似物，对于近一步研究其蛋白功能提

4、供了重要的基础数据。另外，对室温培养30天的水稻进行了冷诱导处理(C40C72小时)，并对UCPI的诱导表达情况进行了NorthernBlot检测和半定量RT-PCR检测，结果表明，水稻苗期UCP1的表达量较低，与Murayama,S等在小麦中的研究结果一致;水稻UCPI能被冷环境诱导，与其他动物和植物的结果相似。关键词水稻解祸联蛋白航天诱变:哈尔滨工业大学工学硕士学位论文AbstractUCPgeneisveryconservative.Itexitsinanimals,plantsandprokaryotesWehavegotsomeprelimi

5、narydataaboutUCPgenesofrice.WehaveclonedEST(expressionsequencetag)andthecodingdomainsequenceofUCPgenesofricewhichhavebeenandhavebeennot(control)carriedonthesatellite.UCPgeneswhichhavebeenfoundinriceincludeUCPIandUCP2,whichhavebeenreportedinGenBank.WeverifiedthattheredoesexitUCP1

6、andUCP2genesinriceandthatUCP2geneislikelymoreconservativethanUCPIgene.WealsofoundthatthereareatleasttwoisoformsofUCPIinrice,whichwecalledUCPIL(long)andUCPIS(short).ThetowisoformsofUCPIhavebeennotreportedbyotherresearchers.ComparedwithUCPICDSinGenBank,UCPILis104basepairslongertha

7、nUCPICDSinGenBank,whichislocatedin3`dexonofUCPIgeneofGenBank.UCPISis52basepairsshorterthanUCPIinGenBank,whichislocatedinthefrontof6`hexon.Thatthetwoisoformsarediscoverinricehasnotbeenreported.WealsocheckedtheexpressionofUCPIinricewithnorthernblottingandserniquantitiveRT-PCR.Ther

8、esultsofNorthernblottingandsemiquantitiveRT-PCR