课题3-血红蛋白的提取与分离教学文案.ppt

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1、课题3-血红蛋白的提取与分离知识回顾--------有关蛋白质的几个问题：1、含量2、组成元素3、相对分子质量4、基本组成单位：结构简式：种类：5、氨基酸连接方式占细胞干重的50％以上，细胞中含量最多的有机物C、H、O、N高分子化合物氨基酸RHCCOOHNH2脱水缩合知识回顾--------有关蛋白质的几个问题：6、肽键7、分子结构8、蛋白质多样性的原因：(多样性的根本原因)9、蛋白质的鉴定方法氨基酸肽链蛋白质脱水缩合盘曲折叠（n条）细胞和生物体的结构物质，是一切生命活动的主要承担者。CONH氨基酸的种类不同；数目成百上

2、千；排列顺序变化多端；多肽链的空间结构千差万别10、生理功能细胞和生物体的结构物质，是人体发育和组织更新的主要原料，具有运输、调节、免疫、催化等作用，是一切生命活动的主要承担者①氨基酸间脱水缩合时，原来的氨基和羧基就不存在了，形成的化合物即多肽的一端只有一个氨基，另一端只有一个羧基（不计R基上的氨基和羧基）。所以对于一条多肽链说，至少应有的氨基和羧基都是一个②若有个n氨基酸分子缩和成m条肽链,则可形成n-m个肽键,脱去个n-m个水分子，至有氨基和羧基各m个11、相关计算③蛋白质可以含有一条或n条肽链、肽链通过化学键（如二

3、硫键）互相连接，具有不同的空间结构④关于蛋白质相对分子量的计算：n个氨基酸形成m条肽链，每个氨基酸的平均相对质量为a，那么由此形成的蛋白质的相对分子量为n·a-(n-m)·18关于血红蛋白1、元素组成：C、H、O、N、Fe2、分子结构:由四条肽链组成3、颜色：红色4、存在细胞：红细胞5、生理功能：运输氧或二氧化碳6、获得方法：选用哺乳动物的血液来分离根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。问：依据什么来分离和提取蛋白质（原理P

4、65图5－13）基础知识阅读并回答　　　　　　　　（P64）1、凝胶色谱法另一个名称；2、凝胶色谱法分离蛋白质的依据；3、凝胶的实质；4、凝胶色谱法的原理；5、凝胶色谱法的具体过程。基础知识（一）凝胶色谱法1、凝胶色谱法的别名：分配色谱法是根据相对分予质量的大小分离蛋白质的有效方法。4、凝胶①性质：一些微小的多孔球体，球内含许多贯穿的通道；②化学本质：多糖类化合物：③实例：葡聚糖、琼脂糖：2、凝胶色谱法的概念：根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。基础知识（一）凝胶色谱

5、法3、依据的特性蛋白质分子量的大小。5、具体过程原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，（）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（），移动速度（），而（）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（）移动，路程（），移动速度（），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量较小较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短较快基础知识（一）凝胶色谱法基础知识（一）凝胶色谱法5、具体过程基础知识（一）凝胶色谱法5、具体过程在小球体内部有许多贯穿的通道，当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路

6、程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。1、我们在什么地方遇到过缓冲物质的？2、缓冲物质有哪些？3、缓冲溶液的作用是什么？4、怎样配制缓冲溶液？基础知识（二）缓冲溶液1、缓冲溶液概念在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。能够抵制外界的酸或碱的对溶液的PH值的影响，维持PH基本不变。2、缓冲溶液作用基础知识（二）缓冲溶

7、液3、缓冲溶液配制通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液。①弱酸和弱酸盐组合H2CO3/NaHCO3CH3COOH/CH3COONa4、缓冲溶液的组分分类基础知识（二）缓冲溶液②弱碱和弱碱盐③多元弱酸的酸式盐和其他所对应的次级盐NH4OH/NH4CINaH2PO4/Na2HPO4KH2PO4/K2HPO4思考：你认为在血红蛋白的提取和分离整个实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和

8、功能，便于观察(红色)和科学研究(活性)。基础知识（二）缓冲溶液生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，为了能够在实验室条件下准确模拟生物体内的过程，就必须保持体外的pH与体内的基本一致。因此，缓冲溶液的正确配制和pH的准确测定，在生物化学的研究工作中有着极其重要的意义。问：在生物化学的研究工作，为什