专题5-课题3-血红蛋白的提取和分离.doc

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1、专题5课题3血红蛋白的提取和分离导学案一、基础知识（一）凝胶色谱法1、凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。2、凝胶实际上是一些微小的球体，这些小球体大多数是由构成的，如葡聚糖或琼脂糖。3、在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度；而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度，即分子量大的分子先从层析中流出来。因此相对分子质量不同的蛋白质得以分离。思考1：如右图，a和b为大小不同的蛋白质，洗脱时，哪个先从层析柱中流出来？为什么？思考2：你能从

2、凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？（二）缓冲溶液1、缓冲溶液的作用是。2、缓冲溶液通常由溶解于水中配制而成的。如磷酸缓冲液（Na2HPO4/NaH2PO4）（三）电泳1、电泳是指。2、许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。电泳利用了待分离样品中各分子的差异以及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。思考：带电荷越多，体积越小，迁移的速度是越快还是越慢？3、两种常用的电泳方法是和，在凝胶中加入SDS，电泳速率完全取决

3、于。二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：、、和。（一）样品处理1、红细胞的洗涤：生理盐水洗涤红细胞的目的是，采集的血样要及时分离红细胞，分离时采用离心（500r/min），然后用胶头吸管吸出上层透明的，将下层暗红色的倒入烧杯，再加入五倍体积生理盐水，缓慢搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至，表明红细胞已洗涤干净。注：为了防止血液凝固，要预先加入抗凝血剂_________________。思考3：兔成熟红细胞、鸡成熟红细胞，优先选哪种材料做实验？为什么？2、血红蛋白的释放：在和作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。3、分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶

4、液离心（2000r/min）后，试管中的溶液分为4层。第一层为无色透明的，第2层为白色薄层固体，是，第3层是红色透明液体，这是，第4层是的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。（二）粗分离：透析取1mL的血红蛋白溶液装入中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为20mmol/L的（PH=7.0）中，透析12h。透析袋能使_________自由进出，而大分子留在袋内。透析可以去除样品中的杂质，或用于更换样品的缓冲液。（三）纯化——凝胶色谱法进行分离纯化（四）纯度鉴定——SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定并进

5、行相对分子质量测定思考4：与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这对蛋白质分离有什么意义？巩固练习1、利用凝胶色谱法，什么样的蛋白质先洗脱出来(　　)A.相对分子质量大的B.溶解度高的C.相对分子量小的D.所代电荷多的2、蛋白质提取和分离分为哪几步(　　)A.样品处理、凝胶色谱操作、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳B.样品处理、凝胶色谱操作、纯化C.样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定D.样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定3、用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质(　　)A．路程较长，移动速度较慢B.路程较长，移动速度较快C.路程较短，移动速度较慢D.路程较短，移动速度较快4、关

6、于电泳的说法不正确的是(　　)A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程B．带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动C．蛋白质在电泳时的迁移率取决于它所带净电荷的多少D．带电荷一定情况下，分子量越大的蛋白质迁移速率一般越慢5、有关血红蛋白质提取和分离的说法，错误的是A、透析法分离蛋白质的原理是利用蛋白质不能通过半透膜的特性B、采用透析法使蛋白质与其他小分子化合物分离开来C、离心沉降法通过控制离心速率使分子大小、密度不同的蛋白质分离D、蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相同的电极方向移动6、有关凝胶色谱法和电泳法的说法正确的是（）A、它们都是分离蛋白质的重要方法B、

7、它们的原理相同C、使用凝胶色谱法需要使用缓冲液而电泳不需要D、凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量小的蛋白质先分离出来7、以下关于血红蛋白提取和分离的过程及原理叙述正确的是（　　）A.红细胞洗涤过程中要加入5倍体积的蒸馏水，重复洗涤三次B.将血红蛋白溶液放在质量分数为O.9%的NaCl溶液透析12小时C.凝胶装填在色谱柱内要均匀，不能有气泡存在D.蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较大的移动速度慢8、下列有关“血红蛋白提取和分离”的相关叙述中，正确的是（　　）A．用蒸馏水进行红细胞的洗涤，其目的是去除细胞表面杂蛋白B．将血红蛋白溶液进行